熒光屬于光致發光，需選擇合適的激發光波長(Ex)以利于檢測。激發波長可通過熒光化合物的激發光譜來確定。激發光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發單色器，使不同波長的入射光激發熒光化合物，產生的熒光通過固定波長的發射單色器，由光檢測元件檢測。最終得到熒光強度對激發波長的關系曲線就是激發光譜。在激發光譜曲線的最大波長處，處于激發態的分子數目最多，即所吸收的光能量也最多，能產生最強的熒光。當考慮靈敏度時，測定應選擇最大激發波長。熒光激發波長對應于某一個紫外可見光譜吸收波長，可能稍大一些，不完全相等。你可以將紫外吸收波長設為激發波長，掃描發射光譜，然后再固定發射波長掃描激發光譜，得到最大激發波長，再做發射光譜，再做激發光譜，一直到得到固定不變的激發和發射波長為止。
紫外吸收波長可以作為激發波長,激發波長的選擇不影響發射波長的選擇,理論上激發光譜和發射光譜有一個鏡像關系,很多人就誤以為,激發波長和發射波長時一一對應的,其實不然,激發光譜的強弱只代表該物質在所選擇的激發波長下被激發的比率,其發射光譜還是原來形狀的光譜,只是在強弱上改變.我們選擇最大激發波長是為了獲得高激發率的物質形態,間接提高靈敏度,選擇最大發射波長是為了直接提高靈敏度