測定細菌對抗菌藥物敏感性的試驗稱為藥物敏感試驗或簡稱藥敏試驗。由于養雞業中抗菌藥物的廣泛使用，導致抗藥菌株越來越多，盲目用藥常常效果不佳。因此，進行藥物敏感試驗已成為正確使用抗菌藥物的必要手段。藥物敏感試驗的方法有多種，如紙片擴散法、試管法、挖洞法等。其中，紙片擴散法簡便易行，出結果快，是目前生產中最常見的方法，現將該種方法介紹如下：
（1）藥敏紙片的準備
常用抗菌藥敏紙片已有商品供應，一般可以買到，可直接利用。
（2）藥敏培養基的制備
①普通肉湯瓊脂：又稱營養瓊脂。蛋白胨10克、氯化鈉（NaCl）15克、磷酸氫二鉀（K2HPO4）1克、瓊脂20克、牛肉浸出液1000毫升（可用牛肉浸膏10克浸于1000毫升蒸餾水代替）。
牛肉浸出液的配制方法：取瘦牛肉去掉脂肪、腱膜等，絞碎或切碎，按500克牛肉加1000毫升蒸餾水混合，置4℃冰箱內過夜，取出后加熱到80～90℃，經1小時后，以數層紗布濾除肉渣并擠出肉水，再用脫脂棉過濾，量其體積并用蒸餾水補足1000毫升，分裝后20分鐘高壓蒸汽滅菌，即制成牛肉浸出液。
將以上其他成分加入到牛肉浸出液中，加熱溶解，冷卻后調pH至7.6，煮沸10分鐘，用濾紙過濾后分裝，再以10.4萬帕高壓蒸汽滅菌25分鐘，取出后冷卻至55℃左右，在90毫升直徑滅菌的平皿上傾注成4毫米厚的平板。做好的平板，密封包裝后可在冰箱中保存2～3周。使用前應將平皿置37℃溫箱中培養24小時，確認無菌后再用于試驗。
②鮮血瓊脂：將滅菌的營養瓊脂加熱融化，至45～50℃時加入無菌鮮血5%（每100毫升營養瓊脂中加入鮮血5～6毫升）傾注平皿。無菌鮮血，用無菌手術取健康動物（綿羊或家兔等）的血液，加入盛有無菌5%檸檬酸鈉溶液的容器中（血與5%檸檬酸鈉的比例為9∶1）混勻，置冰箱中保存備用。
（3）試驗方法
臨床上分離到的細菌進行純培養。用滅菌的接種環挑取被檢菌的純培養物劃線或涂布于平板上，并盡可能使其密而均勻。用滅菌鑷子將藥敏紙片平放于平板上并輕壓使其緊貼平板。直徑9.0厘米的平皿可貼7張紙片，紙片間距不少于24毫米，紙片與平皿邊緣距離不少于15毫米。貼好后將平板底部朝上置于37℃溫箱中培養24小時，取出觀察結果。
（4）結果判定
凡對被檢菌有抑制力的抗菌藥物，由于向周圍擴散，抑制細菌的生長，故在紙片周圍出現一個無細菌生長的圓圈，稱為抑菌圈。抑菌圈越大，說明該菌對此種藥物敏感度越高，反之越低。如果無抑菌圈，則說明該菌對此種藥物具有耐藥性。所以，判定結果時，以抑菌圈直徑的大小來作為細菌對該藥物敏感度高低的標準。
一般來說，抑菌圈直徑70毫米以上為極度敏感，15～20毫米為高度敏感，10～15毫米為中度敏感，10毫米以下為低敏感，無抑菌圈為不敏感。對多黏菌素的作用，抑菌圈在10毫米以上者為高度敏感，6～9毫米為低度敏感。
經藥敏試驗后，應該選擇極度敏感或高度敏感的藥物進行治療。