重金屬是指在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質。如銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鎳、鈷、鋅等。生產過程中遇到鉛的機會較多,鉛又在體內易積蓄中毒,故以鉛為代表進行重金屬檢查。重金屬的存在影響藥物的穩定性及安全性。
一、第一法(硫代乙酰胺法)
1、檢查原理
硫代乙酰胺在弱酸性(pH3.5乙酸鹽緩沖液)條件下水解,產生硫化氫,與重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物混懸液,與一定標準鉛溶液經同法處理呈顏色比較,不得更深。
2、操作方法
除另有規定外,取25mL納氏比色管三支,甲管中加標準鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2mL后,加水或各藥品項下規定的溶劑稀釋成25mL;乙管中加入按各品種項下規定的方法制成的供試品溶液25mL;丙管中加入與乙管相同量的供試品,加配制供試品溶液的溶劑適量使溶解,再加與甲管相同量的標準鉛溶液與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2mL后用溶劑稀釋成25mL。若供試品溶液帶顏色,可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液,使之與乙管、丙管一致;再在甲、乙、丙三管中分別加硫代乙酰胺試液各2mL,搖勻,放置2min,同置白紙上,自上向下透視,當丙管中顯出的顏色不淺于甲管時,乙管中顯出的顏色與甲管比較,不得更深。如丙管顯出的顏色淺于甲管,應取樣按第二法重新檢查。
本法適用于溶于水、稀酸及乙醇的藥物。
二、第二法(熾灼-硫代乙酰胺法)
1、檢查原理
將供試品熾灼破壞后,加入硝酸并加熱處理,使有機物分解破壞完全后,再用第一法進行檢查。
2、操作方法
除另有規定外,必須改用第二法檢查時,取各項下規定量的供試品,按熾灼殘渣檢查法[《中國藥典》(2010版)附錄IXJ]進行熾灼處理,然后取遺留的殘渣;或直接取熾灼殘渣項下遺留的殘渣。如供試品為溶液,則取各品種項下規定量的溶液,蒸發至干,再按上述方法處理后取遺留的殘渣。加硝酸0.5mL,蒸干,至氧化氮蒸氣除盡后(或取供試品一定量,緩緩熾灼至完全炭化,放冷,加硫酸0.5～1.0mL使恰濕潤,用低溫加熱至硫酸除盡后,加硝酸0.5mL,蒸干,至氧化氮蒸氣除盡后,放冷,在500～600℃熾灼使完全灰化),放冷,加鹽酸2mL,置水浴中蒸干后加水15mL,滴加氨試液至對酚酞指示液顯微粉紅色,再加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2mL,微熱溶解后,移置納氏比色管中,加水稀釋成25mL,作為甲管;另取配制供試品溶液的試劑,置瓷皿中蒸干后,加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2mL與水15mL,微熱溶解后,移置納氏比色管中,加標準鉛溶液一定量,再用水稀釋成25mL,作為乙管;再于甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2mL,搖勻,放置2min,同置白紙上,自上向下透視,乙管中顯出的顏色與甲管比較,不得更深。
3、注意事項
熾灼溫度對重金屬檢查影響較大,溫度過高會使重金屬揮發,結果偏低。鉛在700℃經6h熾灼后,回收率只有32%。故熾灼溫度應控制在500～600℃熾灼殘渣加硝酸氧化處理后,必須蒸干除盡氮的氧化物,否則亞硝酸可能氧化硫化氫析出硫,影響比色效果。殘渣加鹽酸處理使重金屬轉化為氯化物。含鈉鹽或氟的有機化合物在熾灼時能腐蝕瓷坩堝,應改用鉑坩堝或硬質玻璃蒸發皿。
本法適用于難溶于水、乙醇的藥物;適用于具有雜環或芳環的有機藥物。
三、第三法(硫化鈉法)
1、檢查原理
在堿性條件下以硫化鈉為顯色劑,使Pb2+與S2-反應生成PbS微粒的混懸液,與一定量的標準鉛溶液經同法處理后所顯顏色比較,不得更深。
2、操作方法
除另有規定外,取供試品適量,加氫氧化鈉試液5mL與水20mL溶解后,置納氏比色管中,加硫化鈉試液5滴,搖勻,與一定量的標準鉛溶液同樣處理后的顏色比較,不得更深。
3、注意事項
硫化鈉試液對玻璃有一定的腐蝕性,久置后會產生絮狀物,故硫化鈉試液應臨使用前配制。
本法適用于難溶于酸性但能溶于堿性水溶液的藥物。