蛋白互作研究技術：「FRET」VS「DuolinkPLA」

熒光能量共振轉移 （FRET）

檢測活體中生物大分子納米級距離和納米級距離變化的有力工具，廣泛應用于生物大分子相互作用分析、細胞生理研究、免疫分析等。

原理

當供體熒光分子的發射光譜與受體熒光分子的吸收光譜重疊，并且兩個分子的距離在 10nm 范圍以內時，就會發生一種非放射性的能量轉移，即 FRET 現象，使得供體的熒光強度比它單獨存在時要低的多（熒光猝滅），而受體發射的熒光卻大大增強（敏化熒光）。

應用

1、生物大分子結構和功能研究：細胞膜受體之間相互作用、細胞內分子之間相互作用、膜蛋白的定位修飾、檢測酶活性變化等2、核酸雜交分析

3、免疫分析：不僅適用于小分子 （如半抗原），而且適用于大分子 （如蛋白質）。

特點

1、實驗背影低，但抗原、抗體純度要求較高；

2、簡便的均相檢測（不需要洗板），操作簡單；

3、實驗產物比較穩定，可用于固相分析或利用特殊的熒光顯微鏡進行單細胞分析，但需要特殊的輔助設備；4、應用靈活多樣檢測組合豐富，需要融合蛋白的表達5、可用于復雜環境下的分析，研究活細胞生理條件下研究蛋白質-蛋白質間相互作用。

6、有效的作為 1.0～10.0nm 距離范圍。

Duolink PLA 技術

蛋白質全面分析技術，完成對蛋白質互作及其修飾的檢測、定量以及確定細胞定位等

原理

Duolink?實驗基于鄰位連接技術（PLA），當一對 PLA probes 足夠接近時（<40 nm）會產生 PLA 信號，由于 PLA probes 特異識別一抗，PLA 信號的強弱直接反映了蛋白表達量水平或蛋白互作的強度， 利用顯微鏡可以觀察到 PLA 信號及其位置。

應用

1、檢測穩定、瞬時和微弱的蛋白互作

2、檢測蛋白的翻譯后修飾

3、高靈敏性的檢測低豐度蛋白的表達

特點

1、可用于未修飾的細胞和組織，可以檢測單一的目標蛋白。

2、識別同一目標的兩個不同抗原表位，靈敏度和精確度遠高于單個表位識別。

3、通過一對鄰位探針環化并且進行滾環擴增，更有利于信號的放大。

4、憑借探針錨定目標蛋白，從而準確的定位目標。

5、針對不同的細胞，組織進行比較和定量分析，能夠自動的篩分靶分子。

綜上比較，FRET 技術可應用于檢測某一細胞中兩個蛋白質分子是否存在直接的相互作用。實驗材料簡便樣本量要求低，減少復雜操作導致的實驗結果誤差較大；低空間分辨率、高靈敏度及適用于復雜體系。

并且高時間分辨率，可以迅速的跟蹤記錄下 rds 甚至級時間內的距離變化，所以適用于酶的催化、肌肉收縮、信號傳遞、主動運輸等方面的研究。可用于高通量篩選等技術優勢。

目前，新開發出的標記方法有酶催化插入、熒光類似物等等。根據 FRET 技術的特點，它在均相熒光免疫分析及核酸分子雜交方面具有廣泛的應用前景總之，FRET 技術以其獨特的優越性，在今后的科研中，將與熒光顯微鏡結合，用于單個活細胞的分析，使人們對生命現象奧秘的探索向前邁進。