電泳轉移后,小心地從固定化材料上剝離凝膠。如果有小塊凝膠留在膜上,用雙蒸水洗,然后用濕的軟棉花擦去凝膠,殘留在膜上的凝膠會導致染色后在膜上出現 “白點”。膜可以貯存,也可以立即染色或用其他方式檢測。大部分用于電泳的染色方法都可用于膜。主要的限制是背景染色。印度黑染色很靈敏,可達 100 ng,而且只有很弱的背景。氨基黑染色背景也很弱,染色時間只要 1 小時,靈敏度為 1.5 μg,可同時用于凝膠和膜。
如將干膜染色,首先應該將膜放在水中,否則高濃度的甲醇會將膜弄扭曲,甚至溶解。如果轉移后在 Denhardt 試劑或牛血清白蛋白中溫育,能得到較好的結果,但背景也較高。使用放射性標記蛋白時,應該先干燥膜再做放射自顯影。
Heukeshoven 等對超薄聚丙烯酰胺凝膠的印跡材料,印跡方法和各種顯色方法,如印度黑染色、銀染、金染等作了全面的綜述。 展開 |