蛋白質染色實驗——考馬斯亮藍染色

1. 凝膠中蛋白質的定位可用考馬斯亮藍染料染色或銀染色。前者簡便且快捷，而銀染法具有相當高的靈敏度，能用于檢出更少量的蛋白質。

2. 蛋白質的存在影響酸堿滴定中所用某些指示劑的顏色變化，從而改變這些染料的光吸收。在些基礎上發展了蛋白質染色測定方法。涉及的指示劑有甲基橙、考馬斯亮藍、溴甲酚綠和溴甲酚紫。目前廣泛使用的染料是考馬斯亮藍。

3. 考馬斯亮藍在酸性條件下為棕紅色，其所含的疏水基團在酸性條件下雨蛋白質的疏水區具有親和力，通過疏水作用與蛋白質相結合，形成藍色的蛋白質染料復合物，在595nm處有最大吸光度，在一定的蛋白質濃度范圍內，蛋白質染料復合物在595nm下的吸光度與蛋白質量成正比。

蛋白質

聚丙烯酰胺凝膠固定液染色液脫色液

濾紙培養箱

1.  將聚丙烯酰胺凝膠放在塑料容器并以3~5倍體積的固定液覆蓋，在旋轉搖床中緩慢揺動2 h。

2.  傾去固定液，以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝膠，并緩慢搖動4 h。

3.  傾去染色液，用約50 ml 固定液沖洗凝膠。
 

4.  傾去固定液，以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動2 h，傾去脫色液，再加入新脫色液同時至獲得藍色條帶及干凈的背景。凝膠可放置在乙酸或水中保存。

5.  需要時，給凝膠拍照。

6.  另外，也可將凝膠放在兩張Whatman 3MM 濾紙上，頂上蓋上塑料保鮮膜。在常規的凝膠干燥機中于80℃干燥1~2 h。

1.  帶手套并僅在通風櫥中進行。

2.  由于氨銀溶液干燥后會發生爆炸，應馬上用大量水沖去。

3. 不可使用石英比色皿（染色不易洗掉）?，可用塑料或者玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇蕩洗，以洗去染色。塑料比色皿決不可以用乙醇或丙酮長時間浸泡。