蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗

樣品溶液

甲醇（HPLC級） 三氟乙酸（TFA）

雙向測序柱（Agilent） 氮氣供應設備 聚丙烯試管 樣品加樣器 上樣漏斗

一、浸潤層析柱

1.將準備好的兩相柱的親水段（凸向接頭）移開，放在一邊。

2.將柱的疏水段（凹向接頭）和上樣漏斗裝配在一起。

3.向下按壓上樣漏斗并且順時針旋轉，將上樣漏斗和柱的疏水段裝人樣品上樣室中。

4.將 1ml HPLC 級的甲醇充滿上樣漏斗。

5.旋緊上樣器的螺旋蓋。

6.打開氮氣（80psi) 維持足夠時間，使上樣漏斗變空，但應確保柱床處于浸潤狀態。

7.旋開螺旋蓋，重復步驟④~⑥，但要用 1ml 的 2%TFA 水溶液代替甲醇。如果容許填充柱干燥，可重復此步驟。

二、準備樣品溶液及上樣

8.用 2%TFA 水溶液稀釋樣品溶液至 1~5 ml，稀釋比至少為 1:1。如果樣品溶液在稀釋前為 1ml，則要保留上樣時的流出液。

9.在柱子下面放一個干凈的小燒杯或 50 ml 的聚丙烯管，收集過柱的流出液。

10.從樣品點樣器上去掉螺旋蓋。

11.用樣品溶液充滿上樣漏斗，使 1ml 的樣品溶液在 2 min 內過柱。

一次能上多于 5 ml 的樣品溶液，但需要比較長的上樣時間。

12.旋緊螺旋蓋，調整氮氣壓力為 80psi。

實驗提示：保留第11 和12 步的流出液，直至樣品已經測序完畢。

13.如果上樣量較大，可重復步驟⑩??。

14.全部上樣完成后，以 80psi 氮氣干燥柱子 30s。

15.去掉螺旋蓋，逆時針旋轉并松開上樣漏斗。

16.取出上樣漏斗和與其相連的疏水柱，將二者分開。