1. 在冰上預冷干凈、干燥的玻璃器皿。用帶有 Teflon-絲帽的玻璃試管混合試劑。
2. 打開或混合試劑前，在冰上預冷所有的溶液。從冰冷的原液中，TFMS:苯甲醚 ( Sigma) 以 2:1 (v/v) 的比例混合。緩慢的向試管內（放在冰上）注入一股氮氣 10 秒鐘，蓋住試管倒轉幾次，然后用氮氣重復處理。保持溶液在冰上。
3. 用凍干或真空離心法制備充分干燥的糖蛋白樣品。
4. 當樣品已干燥，蓋上樣品試管并用封口膜封住蓋子周圍，在冰上充分冷卻。
5. 在干燥、冰冷的蛋白樣品中，加 200 μl 冷的 TFMS:苯甲醚，并完全溶解。
6. 在樣品試管冰浴的同時，用緩慢的一股氮氣快速排氣。迅速蓋上試管蓋，用封口膜再次密封。
7. 樣品保存在冰上 2 小時，然后在 -20℃ 中再保存 2 小時。
8. 放樣品于冰上，加 10 μl 冰冷的 2 mol/L Tris 堿，然后加 300 μl 冰冷的含 10 mmol/L DOC 的 50% TCA。將樣品在冰上放置 20 分鐘。
9. 微型離心機以最大速度（16000 g）4℃ 離心 15 分鐘使蛋白沉淀。用冰冷丙酮清洗沉淀兩次，以輔助去除殘留的苯甲醚。
10. 用真空離心干燥最終沉淀物，懸浮于合適的樣本緩沖液中以備 SDS-PAGE 分析。 展開 | 