實驗方法原理 由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，因此蛋白質具有吸收紫外線的性質，吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內，蛋白質溶液的光吸收值（A280）與其含量呈正比關系，可用作定量測定。
由于核酸在280波長處也有光吸收，對蛋白質的測定有干擾作用，但核酸的最大吸收峰在260nm處，如同時測定260nm的光吸收，通過計算可能消除其對蛋白質測定的影響，因此溶液中存在核酸時必須同時測定280nm及260nm之光密度，方可通過計算測得溶液中的蛋白質濃度。
利用紫外線吸收法測定蛋白質含量的優點是迅速、簡便、不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此，在蛋白質和酶的生化制備中（特別是在柱色譜分離中）廣泛應用。此法的缺點是（1）對于測定那些與標準蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質，有一定的誤差，（2）若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質，會出現較大的干擾。
不同蛋白質和核酸的紫外吸收是不同的，即使經過校正，測定結果也還存在一定的誤差。但可作為初步定量的依據。
試劑、試劑盒 標準蛋白溶液待測蛋白溶液
實驗步驟
一、試劑
1．標準蛋白溶液
準確稱取經微量凱氏定氮法校正過的標準蛋白質，配制成濃度為1mg/ml的溶液。
2．待測蛋白溶液
配制成濃度約為1mg/ml的溶液
二、操作
1．標準曲線的繪制
按下表分別向沒支試管加入各種試劑，搖勻。選用光程為1cm的石英比色杯，在280nm波長處分別測定各管溶液的A280值。以A280值為縱坐標，蛋白質濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
2．樣品測定
取待測蛋白質溶液1ml，加入蒸餾水3ml，搖勻，按上述方法在280nm波長處測定光吸收值，并從標準曲線上查出經稀釋的待測蛋白質的濃度。
三、其他方法
1. 將待測蛋白質溶液適當稀釋，在波長260nm和280nm處分別測出A值，然后利用280nm及260nm下的吸收差求出蛋白質濃度。
計算
蛋白質濃度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260
式中A280和A260分別是該溶液在280nm和260nm波長下測得的光吸收值。
此外，也可先計算出A280/A260的比值后，從下表查出校正因子F值，同時可查出樣品中混雜的核酸的百分含量，將F值代入，再由下述經驗公式直接計算出該溶液的蛋白質濃度。
蛋白質濃度（mg/ml）=F×1/d×A280×N
式中A280為該溶液在280nm下測得得光吸收度值，d為石英比色杯得厚度（cm），N為溶液得稀釋倍數。
紫外吸收法測定蛋白質含量得校正因子
2. 對于稀蛋白質溶液，還可用215nm和255nm的吸收差來測定濃度。從吸收差△Ａ與蛋白質含量的標準曲線即可求出濃度。
吸收差△Ａ＝Ａ215－Ａ225
式中的A215和A225分別式蛋白質溶液在215nm和225nm波長測得的光吸收值。
此法在蛋白質含量達20-100μg/ml的范圍內，是服從Beer定律的。氯化鈉、硫酸銨以及1×10-1mol/l磷酸、硼酸和三羥甲基氨基甲烷等緩沖液都無顯著干擾作用。但是1×10-1mol/l乙酸、琥珀酸、鄰苯二甲酸以及巴比妥等緩沖液在215nm波長下的吸收較大，不能應用，必須降至5×10-3mol/l才無顯著影響。由于蛋白質的紫外吸收峰常因pH的改變而有變化，故應用紫外吸收法時要注意溶液的pH，最好與標準曲線測定的pH一致。
3. 如果已知某一蛋白質在280nm波長處的吸收值[A1%1cm]，則取該蛋白質溶液于280nm處測定光吸收值后，便可直接求出蛋白質的濃度。