Ni柱中的氯化鎳可以與有HIs（組蛋白）標簽的蛋白結合，也可以與咪唑結合。
步驟是：過柱子前可以選擇Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化鎳，一個柱長體積就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，給蛋白提供最適的環境，我一般平衡4個柱長，然后蛋白上樣，你可以讓他自己掛，這樣掛柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加個恒流泵，但是一定不能太快，太快掛柱效果差，當然你也可以選擇循環掛柱，就是恒流泵的一頭接你裝蛋白的燒杯，從柱子中留下來的液體還用同一個燒杯接回去。掛完之后，按理想來講，你的蛋白在Ni柱中與Ni就結合了，雜蛋白多數在燒杯里，留下來了，當然肯定有少量雜蛋白也掛上了，這時候你要梯度洗脫，拿咪唑和你的buffer配，一般從0 20mM 40mM。。。。100mM這樣洗脫（當你不知道你的蛋白大概在什么時候出來的時候）我指的是咪唑的終濃度。咪唑加入之后，會和蛋白爭奪與Ni的結合位點，雜蛋白、你的目的蛋白，會在不同的濃度被洗脫下來，洗完之后，你可以用200mM咪唑洗柱子，清理一切蛋白，然后平衡幾次，是否選擇重生你自己定咯~然后放上20%乙醇保存柱子就可以咯~
過的蛋白用不同的管子收下，然后SDS-page檢測在哪個管子里。