實驗內容及操作方法
（一）血球凝集(HA)試驗
1. 在96孔微量反應板上進行，自左至右各孔加50 uL生理鹽水。
2. 于左側第1孔加50 uL病毒液（尿囊液或凍干疫苗液），混合均勻后，吸50 uL至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，吸棄50 uL；第12孔為紅細胞對照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5%雞紅細胞懸液50 uL，在振蕩器上振蕩，室溫下靜置后觀察結果（表4-1）。
表4-1 病毒血凝試驗的操作方法（單位：uL）
孔 號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
病毒稀釋度 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 | 1:128 | 1:256 | 1:512 | 1:1024 | 1:2048 | 對照 |
生理鹽水 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 |
病毒液 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | |
0.5%紅細胞 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 |
棄50 | ||||||||||||
結果觀察 | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | +++ | + | + | - | - |
4. 結果判定：從靜置后10 min開始觀察結果，待對照孔紅細胞已沉淀即可進行結果觀察。紅細胞全部凝集，沉于孔底，平鋪呈網狀，即為100% 凝集（++++），不凝集者（-）紅細胞沉于孔底呈點狀。
以100% 凝集的病毒最大稀釋度為該病毒血凝價，即為一個凝集單位。從表4-1看出，該新城疫病毒液的血凝價為1:128，則l:128為1個血凝單位，1:64、l:32分別為2、4個血凝單位，或將128/4=32，即1:32稀釋的病毒液為4個血凝單位。
(二) 血球凝集抑制(HI)試驗
1. 根據HA試驗結果，確定病毒的血凝價，配制出4個血凝單位的病毒液。
2. 在96孔微量反應板上進行，用固定病毒稀釋血清的方法，自第1孔至第11孔各加50 uL生理鹽水。
3. 第1孔加被檢雞血清50 uL，吹吸混合均勻，吸50 uL至第2孔，依此倍比稀釋至第10孔，吸棄50 uL，稀釋度分別為：1:2、1:4、1:8 …… ；第12孔加新城疫陽性血清50 uL，作為血清對照。
4. 自第1孔至12孔各加50 uL 4個血凝單位的新城疫病毒液，其中第11孔為4單位新城疫病毒液對照，振蕩混合均勻，置室溫中作用10min 。
5. 自第l孔至12孔各加0.5% 雞紅細胞懸液50 uL，振蕩混合均勻，室溫下靜置后觀察結果（表4-2）。
表4-2 病毒血凝抑制試驗的操作方法（單位：mL）
孔 號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
血清稀釋度 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 | 1:128 | 1:256 | 1:512 | 1:1024 | 病毒 對照 | 血清 對照 |
生理鹽水 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | |
被檢雞血清 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | |
4單位病毒 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 |
室溫中靜置 10 min | ||||||||||||
0.5%紅細胞 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 |
棄去50 | ||||||||||||
結果觀察 | - | - | - | - | - | - | + | ++ | +++ | ++++ | ++++ | - |
6. 結果判定：待病毒對照孔（第11孔）出現紅細胞100%凝集（++++），而血清對照孔（第12孔）為完全不凝集（-）時，即可進行結果觀察。
以100%抑制凝集（完全不凝集）的被檢血清最大稀釋度為該血清的血凝抑制效價，即HI效價。凡被已知新城疫陽性血清抑制血凝者，該病毒為新城疫病毒。
從表4-2看出，該血清的HI效價為1:64，用以2為底的負對數(-log2)表示，即6log2。