一、項目名稱：
血漿凝血酶原時間測定（prothrombin time ，PT）
二、檢驗方法名稱：
凝結法
三、方法學原理：
在確定量的血漿樣本經過一定時間的加溫后，加入試劑。加入試劑后，采用波長為660nm的光照射樣本。凝血過程（纖維蛋白原轉化為纖維蛋白）中血的渾濁度可以通過測量散射光光強度的改變來測定。從散射光光強度的測定，可以做出凝血曲線，通過Percentage Detection Method法求得凝血時間。
四、方法學溯源：
凝血酶原時間（PT）測定是Quick于1935年創立的。在受檢血漿中加入過量的組織凝血活酶（人腦、兔腦、胎盤及肺組織等制品的浸出液）和鈣離子，使凝血酶原變為凝血酶，后者使纖維蛋白原轉變為纖維蛋白。觀察血漿凝固所需要的時間即凝血酶原時間。其凝固時間取決于凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。該試驗是反映外源凝血系統最常用的篩選試驗。
五、儀器：
（一）型號：Sysmex CA—1500自動血液凝血分析儀
（二）分析和計算參數：
1．處理量：約120個測試/小時
2．所需樣本量：50μl
3．檢驗時間：在最長檢驗時間之內測出結果，典型最長檢驗時間：100秒
4．重復性：CV≤2%
5．計算參數：凝血酶原活動度（PT%）
凝血酶原比值（PT R）
國際標準化比值（INR）
六、試劑及配套品：
（一）試劑：
1. 凝血活酶含鈣試劑（Thromborel? S）
（1）商標：德靈（DADE BEHRING）
（2）包裝規格：Pack for 10×4ml
（3）代碼：No.OUHP 29 , or
（4）參數：ISI（國際敏感度指數）=0.97
（5）成分：
1）Thromborel? S Reagent :
a. 凍干人胎盤促凝血酶原激酶（lyophilized human placental thromboplastin）
b. 氯化鈣 (calcium chloride)
c. 穩定劑 (stabilizers)
2) 防腐劑（Preservatives）:
a.慶大霉素（Gentamicin）(0.1g/L)
b. 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（5-chloro-2-methyl-4-isothiazol-3-one and 2-methyl-4-isothiazol-3-one）（最大量 20mg/L）
2．佛羅那巴比妥緩沖液（Dade? Owren'S Veronal Buffer）
（1）商標：德靈（DADE BEHRING）
（2）包裝規格：Pack for 10×10ml
（3）代碼：B4234-25
（4）成分：
1）2.84×10-2M的巴比妥鈉 (sodium barbital)
2）1.25×10-1M的氯化鈉 (sodium chloride)
3) PH 7.35±0.1
3. 清洗液（Cleaning）
2%次氯酸鈉溶液（自配）
（二）配套品：
1.標準血漿（Standard Human Plasma）
(1) 商標：德靈（DADE BEHRING）
(2) 代碼：No. ORKL
2.校準質控血漿（Ci-Trol?）
(1) 商標：德靈（DADE BEHRING）
(2) 代碼：Level 1, B4244-10
Level 2, B4244-20
Level 3, B4244-30
3.質控血漿（Control Plasma）
(1) 商標：太平洋（Pacific Hemostasis）
(2) 代碼及規格：Level 1 (Normal), 100595 10×1ml
Level 2 (Abnormal), 100596 10×1ml
Level 3 (Abnormal), 100597 10×1ml
七、操作步驟：
（一） 開機：開機前，先打開連機的打印機。按下機器右邊的POWER按鈕。開機后機器進行自檢，當屏幕上邊顯示“Ready”時可以進行試驗。
（二）洗針：在主屏幕上選“Rinse Probe”，然后按下“Execute”進行洗針。
（三）準備試劑：按照儀器試劑位置程序要求，把每一項的試劑準備好，放在相應的位置。（注：PT試劑的配制：在凍干粉試劑瓶中加入蒸餾水4ml，于37oC溫箱或水浴箱中放置30min）。
（四）準備標本：將室內質控和離心好的樣本放在相應的樣本架上（一個架子可放10個樣本），準備好放在進樣器上。
（五）準備反應杯：打開儀器上蓋裝反應杯的蓋子，查看反應杯是否夠量，需及時添加。
（六）輸入試驗項目：按下主菜單上的“Work List”鍵，在試驗項目鍵點擊PT，使PT鍵由“—”變為“O”。如有需要按屏幕下的“Repeat”鍵，儀器會自動重復十個樣本的檢測項目與第一個樣本相同。屏幕右邊的光標移動鍵，按下“NEXT”表示翻到下一個界面，按“↑”表示向上移動光標，“←或→”表示下一個界面試驗項目。
（七）輸入樣本號：按下“ID No.Entry”，按順序輸入樣本的序號或病人的病歷號。
（八）開始檢測：待一切準備工作就緒，按下儀器右上角“START”鍵，儀器開始工作。
（九）查看結果：返回主屏幕，檢測的項目如果由“◎”變為“●”表明此試驗已經完成，然后按下“Stored Date”（儲存結果）鍵，屏幕會換到結果顯示界面，檢測的結果會自動傳輸到此畫面，如果查看反應趨勢圖，按下邊第一個菜單“Graph”，查看凝集趨勢、吸光度、結果等。
（十）洗針：當做完一批標本以后，需要洗針，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute”進行洗針。
（十一）關機：回到主屏幕下，在洗完針以后方可關機，切斷電源，關閉打印機。
八、 參考范圍：PT（sec）：11—14 s
PT% ：80%—120%
PT R ：1±0.15
INR ：0.8—1.5
九、 臨床意義：
（一）PT延長
1．外源凝血系統的因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和纖維蛋白原減低，如先天性某因子缺乏癥和低（無）纖維蛋白原血癥，但均很少見，獲得性的見于DIC、原發性纖溶、維生素K缺乏癥、肝臟疾病等。
2．血循環中抗凝物質增加，如肝素或FDP增多等。
（二）PT縮短 口服避孕藥、高凝狀態和血栓性疾病等。
（三）用于香豆素類等口服抗凝劑的監控
1．一般認為以維持PT值在參考值的2倍左右（1.3—2.5倍）即25—30s，或PT R為1.3—1.5（最大不超過2）為宜。
2．PT%應控制在40%以上，減低到40%有出血傾向。
3．不同情況下口服抗凝藥治療的最佳抗凝強度時INR的范圍：
（1）術前兩周或術中口服抗凝藥，INR為1.5—3.0；
（2）原發或繼發靜脈血栓的預防，INR為2—3；
（3）活動性靜脈血栓、肺梗塞、復發性靜脈血栓的預防，INR為2—4；
（4）動脈血栓栓塞的預防，心臟換瓣術后，INR為3—4.5。
十、病人準備和標本要求：
（一）采血時，首先應該確認病人姓名，并且將姓名和編號寫在真空采血管的標簽處。
（二）盡可能保證每次采血都在同樣的條件下進行，即病人處于休息狀態，并且在早餐前采血。
（三）凝血實驗標本最好不與其它實驗一起采集，否則由于標本的分配、分裝等而使血液停留在針管的時間延長。
（二）取血時，病人應松弛，環境溫暖，防止靜脈痙攣，止血帶的壓力應盡可能小，取血速度平穩順利，防止產生氣泡。，。
（三）用定量為3毫升的一次性枸櫞酸鈉（0.11mol/L）真空采血管采血至指定刻度，取血完畢立即輕輕顛倒混均混合均勻，不要劇烈震蕩，并避免產生氣泡。
（四）及時離心，3000轉/分離心標本10分鐘，以除去血小板。
（五）務必于采血后2小時內測定完畢,如不能完成試驗，冷凍貯存少量血漿（0.5—1ml）（最好在-70℃，或者當貯存時間較短時，可以置于-20℃條件下），在實驗前將血漿于37℃下快速融化。血漿用塑料試管存放，并用塑料吸管移取標本。
十一、操作注意事項：
（一） 許多的實驗誤差都來源于技術的錯誤。在實驗技術、試劑、溫度及PH值上很小的變化都會導致試驗結果明顯的變化。孵育時間與溫度是凝血酶原時間測定時應嚴格控制的參數。血漿絕不能在37°C下放置10min。