注意事項
(1)比色法:
①乳酸鉀、乳酸鈉也可作為LDH底物,但因其為水溶液,含量不夠準確,且保存不當易產生酮酸類物質,抑制酶促反應。而乳酸鋰為固體,穩定,易于稱量。
②除二乙醇胺緩沖液外,也可用Tris或焦磷酸緩沖液,避免了原金氏法中甘氨酸緩沖液對LDH的抑制作用,提高了陽性檢出率。
③比色應在5~15min內完成,否則吸光度降低。
④結果>2500U時,可用生理鹽水稀釋標本后再測,其結果乘以稀釋倍數。
(2)連續監測法:
①標本勿溶血,當溶血達Hb 0.8g/L時,LDH活性可升高58%。
②標本于室溫(25℃)保存,2天內酶活性穩定,冰箱保存酶活性降低,-20℃過夜LDH3、LDH4則全部失活。
③用血清或肝素抗凝血漿測定結果滿意,草酸鹽可抑制LDH活性。
④復溶后溶液變濁或初始吸光度>0.5應棄去。
⑤利用正逆雙向反應均可測定乳酸脫氫酶活性,但因反應溫度、底物和緩沖液濃度不同,其參考區間也有差異。以乳酸和NAD為底物,在340nm監測吸光度增高速率為正向反應,以LD-L表示;以丙酮酸和NADH為底物,監測340nm吸光度下降速率為逆向反應,以LD-P表示。正逆反應兩法相比,LD-L法的主要優點是:A.正向反應底物液的穩定性比逆向反應的穩定性大,前者冰箱可保存6個月以上,而后者僅幾天;B.速率反應的線性范圍(吸光度對監測時間t作圖)較寬;C.重復性比LD-P好。由于逆向反應速度比正向反應速度快,其參考值約為LD-L的2倍。
檢查過程
靜脈采血后立即送檢,檢測方法:
(1)比色法:
混勻,室溫放置5min后,在440nm波長,比色杯光徑1.0cm,蒸餾水調零點,讀取各管吸光度,以AU-AC之差值查標準曲線,求出LDH活力單位。
(2)連續監測法:
各實驗室可根據本室生化自動儀型號及說明書操作。主要參數為340nm波長,37℃,吸樣量500μl,連續監測時間60s,標本與試劑體積之比為1∶50。