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  • 發布時間:2020-08-10 17:38 原文鏈接: 血清粘蛋白測定實驗

    實驗方法原理0.6 mol/L 過氯酸測定血清中蛋白質時粘蛋白不被沉淀,而存留于濾液中,再加磷鎢酸使粘蛋白沉淀,然后以酚試劑測定其中蛋白質的含量。
    實驗步驟
    注意事項

    1、本法影響因素很多。正常值觀察報告不一,故無論用蛋白或酪AA表示結果,均須說明所采用的方法及正常值。

    2、操作中血清與154mmol/L氯化鈉液稀釋液必須準確。

    3、滴加過氯酸的速度宜慢。以30-40s時間內加完2.5ml為宜,速度過快易發生混濁,離心后不易得到清晰的上清液。

    4、過氯酸沉淀血清蛋白在30℃以下進行較好,否則結果編低。

    5、過氯酸為強氧化劑,應按危險品條例保存。

    一、實驗試劑:

    1. 154mmol/L氯化鈉溶液.

    2. 1.8mol/L過氯酸:取含水量為70%-72%過氯酸28ml,加蒸餾水稀釋200ml并標定之.

    3. 17.74mmol/L磷鎢酸溶液,稱取磷鎢酸5g溶于2mol/L鹽酸中并加至100ml。

    4. 酚試劑:于1500ml球形燒瓶中加鎢酸鈉100g,鋁酸鈉(Na2MoO4·2H20)25g,水700ml,濃磷酸50ml,濃鹽酸100ml:緩緩用細流蒸餾10h。取下冷凝管,加硫酸鋰75g,蒸餾水50ml,并加溴水2-3滴,再煮沸15min,以除去多余的溴,冷卻后稀釋至1000ml,制成的酚試劑為鮮明黃色,置棕色瓶保存,用前取出一部分,以等量蒸餾水稀釋之。

    5. 1.88mol/L碳酸鈉溶液。

    6. 標準酪氨酸溶液(1ml=0.05mg);精確稱取酪AA5mg,以0.lmol/L鹽酸溶液并稀釋至100ml。

    二、實驗操作:

    血清0.5ml,加154mmo/L氯化鈉4.5ml,混勻,1.8mol/L,過氯酸溶液2.5ml,靜止10min,用定量濾紙過濾或離心.取溶液2.5ml,加17.74mmol/L磷鎢酸0.5ml混勻,靜止10min,以3000r/min離心10min,傾去上清液瀝干,再加磷鎢酸溶液2ml,懸浮沉淀物,同法離心后傾去上清液.取沉淀備用。

    按下表測定


    混勻,放置37℃水浴15min,取出比色,用分光光度計650nm,比色杯光徑1.0cm,以空白管調零,讀取各管吸光度。

    三、計算:

    血清粘蛋白(g/L)=測定管吸光度/標準管吸光度×1.785血清粘蛋白(mg/L)(以酪氨酸計)測定吸光度/標準管吸光度×75

    參考值:以蛋白計為0.71-0.87g/L

    以酪氨酸計為33.8土27mg/L


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