一、實驗試劑:
1. 154mmol/L氯化鈉溶液.
2. 1.8mol/L過氯酸:取含水量為70%-72%過氯酸28ml,加蒸餾水稀釋200ml并標定之.
3. 17.74mmol/L磷鎢酸溶液,稱取磷鎢酸5g溶于2mol/L鹽酸中并加至100ml。
4.
酚試劑:于1500ml球形燒瓶中加鎢酸鈉100g,鋁酸鈉(Na2MoO4·2H20)25g,水700ml,濃磷酸50ml,濃鹽酸100ml:緩緩用細流蒸餾10h。取下冷凝管,加硫酸鋰75g,蒸餾水50ml,并加溴水2-3滴,再煮沸15min,以除去多余的溴,冷卻后稀釋至1000ml,制成的酚試劑為鮮明黃色,置棕色瓶保存,用前取出一部分,以等量蒸餾水稀釋之。
5. 1.88mol/L碳酸鈉溶液。
6. 標準酪氨酸溶液(1ml=0.05mg);精確稱取酪AA5mg,以0.lmol/L鹽酸溶液并稀釋至100ml。
二、實驗操作:
血清0.5ml,加154mmo/L氯化鈉4.5ml,混勻,1.8mol/L,過氯酸溶液2.5ml,靜止10min,用定量濾紙過濾或離心.取溶液2.5ml,加17.74mmol/L磷鎢酸0.5ml混勻,靜止10min,以3000r/min離心10min,傾去上清液瀝干,再加磷鎢酸溶液2ml,懸浮沉淀物,同法離心后傾去上清液.取沉淀備用。
按下表測定

混勻,放置37℃水浴15min,取出比色,用分光光度計650nm,比色杯光徑1.0cm,以空白管調零,讀取各管吸光度。
三、計算:
血清粘蛋白(g/L)=測定管吸光度/標準管吸光度×1.785血清粘蛋白(mg/L)(以酪氨酸計)測定吸光度/標準管吸光度×75
參考值:以蛋白計為0.71-0.87g/L
以酪氨酸計為33.8土27mg/L |