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  • 發布時間:2020-09-01 09:54 原文鏈接: 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳原理和操作

    [原理] 血清脂蛋白經飽和乙酰蘇丹黑B染色后,以瓊脂糖凝膠為載體,在pH8.6巴比妥緩沖液中電泳分離,各種脂蛋白將分成不同區帶。

    [器材]

    1.玻片

    2.水平式電泳儀

    [試劑]

    1.0.5%瓊脂糖(Agarose)溶液:稱取0.5g瓊脂糖,加巴比妥緩沖液100ml,盛于三角燒杯中,置沸水浴中煮沸溶解,備用。

    2.新鮮血清(無溶血)

    3.pH8.6、I=0.075 巴比妥緩沖液:稱取15.4g巴比妥鈉,2.76g巴比妥,0.292gEDTA,以水溶解后加至100ml,調pH至8.6,4℃保存。

    4.蘇丹黑B染色液:蘇丹黑B 100mg,異丙醇10ml,混合。置37℃水浴使之充分溶解后,離心取上清液置室溫備用。

    [操作]

    1. 制板

    配制0.5%的瓊脂糖或預先配好置4℃冰箱,用時置沸水溶解,再冷卻到50℃~60℃,取約4ml瓊脂糖迅速鋪在玻璃片上,然后放上開槽器(注意:①開槽放在中央,距一側1.5cm處;②避免產生氣泡),靜置室溫待凝固,把開槽器小心取下,樣品槽即制成。

    2. 加樣

    取預染血清20ml加入樣品槽 (預染血清:血清0.2ml + 蘇丹黑B染色液0.02ml)

    3. 電泳

    將載有瓊脂糖凝膠玻片(已加血清樣品)放在電泳槽中,槽內倒入巴比妥緩沖液,用四層紗布搭板,加樣端接負極,電壓120V,待最前端區帶泳動至玻片2/3處時可終止電泳,觀察實驗結果。

    [參考值]

    正常人血清脂蛋白可分出三條區帶:

    b脂蛋白(占55%,著色最深)

    前b脂蛋白(占15%,著色最淺)

    a脂蛋白(占30~40%,著色居中)

    在原點處應無乳糜微粒可見

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