表達蛋白檢測實驗_免疫沉淀法

磷酸緩沖液（PBS）細胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸

完全 MEM-5 培養基（含和不含蛋氨酸／半胱氨酸兩種）

1. 培養細胞，用病毒感染細胞（見基本方案 4 步驟 1～4）。

2. 加入 2 ml 的完全 MEM-5 培養基，按所選用啟動子的類型決定培養時間：早期啟動子為感染后的 1~6 h；晚期啟動子為感染后的 4~20 h。

3. 吸出培養基，加入含有 25~50 mCi [³⁵S] 蛋氨酸或 [³⁵S] 半胱氨酸的 0.5 ml 完全不含蛋氨酸或半胱氨酸的 MEM-5 培養基和 35 μl 完全 MEM-5 培養基，培養 2~3 h 到過夜。

4. 追加 0.15 ml 的完全 MEM-5 培養基，繼續培養 1 h。

5. 吸出培養基，如果是分泌型表達蛋白則保存培養基。

如果分析培養基，將其離心 3 min 以去掉殘留的細胞。

6. 加入 1 ml 的 PBS，刮下細胞，將其轉入微量離心管，室溫最大轉速離心 3 min，棄上清。

7. 用 200 μl 細胞裂解液重懸細胞，渦旋混勻并在冰上放置 10 min。

8. 40℃，最大轉速離心 10 min。吸出上清，進行免疫沉淀。

1. 此單元的培養都在加濕的 37℃ 5% CO₂ 培養箱中進行，除非有特殊說明。

2. 與活細胞接觸的器械和試劑都應該是無菌的，操作也必須是無菌操作。