1.詢問病史
部分患兒有家族遺傳史。
2.眼底檢查
（1）適應證一旦懷疑視網膜母細胞瘤，要盡快進行全麻下眼底檢查。
（2）隨訪檢查每個介入治療或靜脈化療周期結束后，要進行眼底檢查，評估腫瘤風險。
（3）檢查方法檢查前的前半小時用美多麗眼水充分散大瞳孔。麻醉滿意后用開瞼器將眼瞼分開，在Retcam下進行眼底檢查，并頂壓檢查周邊視網膜。
（4）分期初次眼底檢查后對視網膜母細胞瘤進行分期，如下：
1）GroupA（風險非常低）小的獨立的遠離關鍵結構的腫瘤（直徑≤3mm，局限于視網膜內，距黃斑>3mm，距視盤>1.5mm，無玻璃體、視網膜下播散）；
2）GroupB（低風險）獨立的任意大小部位局限于視網膜內的腫瘤（非GroupA的，無玻璃體、視網膜下播散、小的局限的視網膜下液距腫瘤≤3mm）
3）GroupC（中度風險）獨立的任意大小部位的腫瘤，只要有局限播散（任意播散必須局限微小<3mm任意大小部位的視網膜腫瘤可出現達到1/4的網膜下液）
4）GroupD（高風險）腫瘤位于眼內，廣泛玻璃體、視網膜下種植和/或大塊、非獨立內生或外生腫瘤（播散比GroupC更廣泛，可有細小或油脂樣玻璃體播散或者無血管團塊的網膜下種植）
5）GroupE（非常高風險）眼球解剖、功能破壞（具有新生血管性青光眼、大量眼內出血、無菌性眶蜂窩織炎、腫瘤在玻璃體前、腫瘤接觸晶體、彌漫、眼球癆）
3．B超檢查
可分為實質性和囊性兩種圖形，前者可能為早期腫瘤，后者代表晚期腫瘤。
4.CT檢查
（1）眼內高密度腫塊。
（2）腫塊內鈣化斑。
（3）視神經增粗，視神經孔擴大，說明腫瘤向顱內蔓延。
5.MRI檢查
與CT相比，無放射性損傷，可以較好的觀察球后視神經有無增粗。
6.術后病理檢查
對摘除眼球進行病理檢查，明確眼底腫瘤性質，視網膜母細胞瘤對分化程度，以及有無突破眼球壁，視神經斷端有無腫瘤細胞浸潤。指導下一步治療。
7.熒光眼底血管造影
早期即動脈期，腫瘤即顯熒光，靜脈期增強，且可滲入瘤組織內，因熒光消退遲，在診斷上頗有價值。
8.前房細胞學檢查
在熒光顯微鏡觀察下，瘤細胞呈橙黃色，陽性檢出率高。現已作為光化學治療前明確診斷及治療后療效觀察的指標。
9.尿化驗
患者尿中香草扁桃酸（VMA）和高香草酸（HVA）24小時排泄增多。故當尿中VMA和HVA陽性時有助于診斷，但陰性仍不能排除腫瘤。
10.乳酸脫氫酶（LDH）的活力測定
當房水內LDH值高于血清中的值，二者之比大于1.5時，有強烈提示視網膜母細胞瘤的可能。
11.其他
尚可作同位素掃描、鞏膜透照法、癌胚抗原等。Rb發展到三、四期后一般是容易診斷的，但在一、二期時就比較困難，這個時期在它的晶狀體后瞳孔區內可出現白色反光或黃白色組織塊叫白瞳孔。