解密：干細胞在急診創傷治療中扮演的重要角色！！

　　什么是干細胞 ？干細胞在急診創傷治療中到底扮演一個什么樣的角色？下面就讓我們帶著這些問題進行深入的科學探索。

　　干細胞是一種多功能細胞，能夠再生人體的各種組織，因此在創傷治療中有一定的臨床潛力，特別是在骨折愈合、軟骨愈合及創傷后炎癥等方面。

　　迄今為止，研究主要集中在了解干細胞的行為和功能，雖然有些轉化的應用已經達到了1期臨床試驗，但在干細胞治療真正達到臨床實踐之前，還有許多問題等待解決。

　　1 干細胞的生物學

　　身體里的再生細胞可以根據能力來進行分類，其中再生能力最強是全能型的胚泡細胞，然后是多功能干細胞、祖細胞和前體細胞，這些細胞具有內在的再生能力，當然這里面也有與創傷相關的特殊干細胞。

　　干細胞是未分化的細胞，從三個原始生殖層（內胚層、中胚層和外胚層）發展而來，具有自我更新和分化為各類成熟細胞的能力。

　　干細胞是在全身的某個局部微環境中被發現的，在這個環境中干細胞處于未分化的休眠狀態。在干細胞和鄰近細胞之間存在多種分子機制控制著其分化和自我保護。

　　這里主要介紹與創傷修復相關性的4種細胞：間質干細胞（MSC），造血干細胞（HSC），脂肪干細胞（ADSC）和內皮祖細胞（EPC）。其中MSC和HSC大部分主要存在于骨髓內，EPC位于內皮細胞，而ADSC存儲于脂肪組織。

　　值得注意的是，目前有新技術可以將收獲的體細胞轉化為誘導多能干細胞（ipsC）并獲得潛在的再生能力。

　　間充質干細胞（MSC）是一種多功能的干細胞，可以在中胚層內分化成任何非造血細胞，如成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞和骨髓細胞。它們的特征是細胞表面攜帶標志物CD105、CD73和CD90。

　　MSC可以在多個部位采集，包括肌肉、脂肪組織、骨髓和自體臍帶中，現有技術可以在體外進行篩選、培養和增殖以供在機體移植時使用。

　　MSC是臨床試驗中研究最多的一類干細胞，骨髓間質干細胞由于缺乏MHC II類分子和協同刺激分子使得它們免疫原性削弱，與多功能胚胎干細胞相比它們也不會導致畸胎瘤的形成，這些性質使得它們在自體和異體的臨床應用中更有吸引力。

　　造血干細胞（HSC）能夠分化成為粒細胞或淋巴細胞，這些細胞的特征是表面攜帶標志物CD34、CD45、CD133和Thy1，它們能從骨髓及外周血中獲得，可在惡性腫瘤如白血病細胞、淋巴瘤和骨髓衰竭等同種異體移植中應用。

　　脂肪干細胞（ADSC）由脂肪組織中獲得，與骨髓來源的間質干細胞功能相似，這些細胞的特征是表面攜帶標志物CD90、CD73和CD44。

　　內皮祖細胞（EPC）具有血管生成的潛力，它們存在于外周循環中，表面攜帶標志物CD34，Flk-1和Tie-2。

　　2 創傷對干細胞的影響

　　創傷導致組織結構性破壞，使組織灌注受損，并誘發炎癥反應。干細胞對創傷的生理反應包括從它們的休眠狀態中蘇醒，從它們的原始居住場所中動員并向受傷的部位遷移，最后分化產生治療所需的特定細胞。

　　此外，病理性的炎性反應不僅會導致干細胞的功能失調，同時會使干細胞的數量減少，最終將導致組織再生失敗或其他不良預后。

　　在創傷后MSC與HSC的遷移已被許多趨化作用闡明。其中一種信號途徑就是下圖所示的基質衍生因子1/特異性趨化因子受體4（SDF-1/CXCR4）軸。

　　這條信號軸解釋了干細胞在局部停留及向受傷部位遷移的過程。CXCR4是骨髓間質干細胞的一種受體，它能結合SDF-1。

　　SDF-1是一種由骨髓內皮細胞和基質細胞表達的蛋白質，繼受傷后，SDF-1在組織損傷的部位產生，其濃度高于骨髓，從而促進骨髓中MSC向受傷部位轉移。

　　SDF-1的表達受缺氧誘導因子-1（HIF-1）和一氧化氮（NO）調控。在正常生理情況下，骨髓中的SDF-1濃度有利于保留骨髓間質干細胞。這在動物骨折和心肌損傷模型中已被證實， CXCR4 受體的上調也使得間質干細胞向SDF-1遷移得到進一步加強。

　　3 干細胞在創傷愈合中的作用

　　骨折會引起骨髓內MSC的增生，骨折后會引起在骨髓和骨膜內的常駐干細胞遷移至損傷部位。在骨折部位需要有一定數量的干細胞進行修復，同時骨萎縮也被證實與骨折部位缺乏MSC有關。

　　充足的血供是干細胞遷移并存活的必要條件。Atesok, K等發現在小鼠骨折后進行純化的EPC注射，有利于血管增生及更快的骨折愈合：在骨折部位EPC的血管生成效應與增加的親血管生成因子hVEGF、hFGF2和hHGF 44的局部水平相關；

　　同時還發現MSC的遷移與增加的小鼠骨痂體積和強度有關聯。MSC約在EPC使用后第14天出現在骨折部位。這些治療效果與MSC遷移后局部BMP-21（骨形態生成蛋白）的表達有關。

　　干細胞已被證明能對機械刺激產生反應。體外研究已經證實了干細胞對以下刺激有反應，如牽拉、壓迫、剪切、震蕩、超聲波等。在拉伸、壓迫和超聲波等刺激下，干細胞可表現出成骨分化。

　　相反地，Dai等人發現，對小鼠的MSC進行反重力作用的試驗可抑制其成骨分化。有研究表明在體外試驗時，低強度脈沖超聲波可促進MSC的成骨轉化。

　　4 干細胞在軟骨愈合中的作用

　　干細胞的功能與關節軟骨損傷的恢復以及創傷后骨關節炎有關。在損傷的發生后，關節軟骨中的MSC會分化成纖維細胞，而不是軟骨細胞。

　　創傷時關節組織纖維化的情況更少，由此表明創傷可引起干細胞分化的變化，并與創傷后骨性關節炎息息相關。

　　通過干細胞在關節內注射能改善創傷引起的軟骨缺損。研究發現在小鼠模型中進行皮下注射干細胞對軟骨愈合沒有影響。Saw等在50名軟骨損傷的病人中進行了一項臨床試驗：50名患者隨機分組，治療組接受來自血液或透明質酸的自體干細胞，對照組僅接受透明質酸治療。每一位病人都行關節鏡下的軟骨鉆孔及軟骨成形術，然后進行為期5周的膝關節注射并在第18個月行關節鏡檢查活檢。

　　組織學分析及核磁共振檢查顯示，與對照組相比，治療組干細胞的軟骨再生能力有所提高，但是關節功能評分并無差別。Oroszco等使用骨髓內分離的MSC來治療50名膝骨關節炎患者，結果發現疼痛和功能評分得到了顯著改善。

　　Vangsness等人研究了關節鏡下半月板切除術后的關節內注射MSC的效果，結果發現半月板組織再生增加，伴有骨關節炎患者的疼痛評分得到改善，且在隨后的兩年隨訪中沒有出現嚴重的不良反應。

　　使用MSC的治療方法有望能夠改善骨關節炎和創傷后的軟骨缺損。目前研究的重點是確定最佳的MSC來源、如何在植入前進行體外改造及更安全地使用。關于骨關節炎治療的已有多篇文獻得出肯定的結論，只不過在臨床應用前仍需要進行更多的研究。雖然MSC在骨關節炎和創傷后關節炎的治療目的都是重新生成透明軟骨，但這兩種病理的微環境各不相同，目前還不清楚對于骨關節炎的治療方法是否也同樣能有效地治療創傷后關節炎。

　　5 干細胞在血管生成中的作用

　　對于創傷修復來說，恢復良好的血供是治療的關鍵。創傷可導致急性和遲發性的毛細血管損傷，包括直接傷害、血管閉塞或因外科手術治療創傷時所造成的醫源性損傷。

　　在受傷后，干細胞對血管生成有直接和間接的影響。一些研究表明，EPC遷移到受傷的部位后直接參與了新生血管的形成。其他的研究也已經證實EPC通過生長因子、細胞因子的調節促進新生血管生成。MSC和ADSC也有促進血管生成的類似作用。這些干細胞的血管生成功能最終有助于改善骨折的愈合、毛細血管再生、傷口的康復及減少炎癥并發癥。

　　6 干細胞在外傷后炎癥反應中的應用

　　干細胞具有免疫調節功能，MSC可以轉化為促炎癥和抗炎細胞，它主要依賴于在創傷后炎癥反應中分泌的介質如Toll樣受體(TLR)。

　　TLR是一種表面受體，它能結合病原體分子和損傷相關模式分子 (一類由創傷后細胞破壞釋放的內源性產物，包括線粒體DNA(mtDNA)，高機動性的編組框-1蛋白質和S100蛋白質等，具有激活免疫細胞的能力)，在調控炎癥反應中起著重要的作用。

　　創傷后引起的中性粒細胞和巨噬細胞激活會對干細胞造成損傷。在機體受傷后，中性粒細胞和干細胞一起遷移到受傷的部位，但它們遷移到創傷部位的時間點不同。

　　中性粒細胞被激活后會釋放活性氧，無意中損害了周圍的細胞包括干細胞。如果損傷足夠嚴重，中性粒細胞的激活狀態持續存在(尤其是在細胞凋亡之后)，那么干細胞就可能會被破壞。

　　嚴重的創傷后會導致骨髓衰竭，創傷后高炎癥反應狀態和G-CSF（粒細胞集落刺激因子）濃度升高將導致骨髓干細胞造血功能受損，并容易引發感染。在動物實驗中發現通過MSC治療能逆轉骨髓損傷。