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  • 發布時間:2019-03-28 16:07 原文鏈接: 解析多肽分離實驗

    CE 分離來自復合體混合物如蛋白酶解產物的特定多肽尤其有用。以下的方案闡述使用低壓樣品注射的 P/ACE 5000 CE 儀器(Beckman) 的用法。但其他儀器也可以依據制造商的操作指南進行同樣的分離。

    實驗材料

    多肽混合物

    試劑、試劑盒

    0.05 mol/L 和 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.30 存儲于 4℃)0.1 mol/L 氫氧化鈉

    儀器、耗材

    75 μm 內徑的融合硅毛細管柱CE 儀器

    實驗步驟

    1. 用以下溶液沖洗進行預處理毛細管:

    10 倍柱體積的 0.1 mol/L NaOH,在低壓(0.5 lb/in2)下

    10 倍柱體積的水

    4 倍柱體積的 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30。

    存儲柱于 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30,25℃。


    2. 將 10 nmol (約 300 g) 溶于 10 ml 的 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30,制備多肽混合物。以每管 100 μl 凍存未用的混合物。


    3. 在 0.5 lb/in2,10 s 內用低壓注射上樣 10~20 nl 樣品。


    4. 使用以下條件分離多肽混合物:

    電解質:0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.3

    探測波長:200 nm

    溫度:25℃

    電壓:25 kV


    5. 用以下溶液清洗柱子:

    0.5 min,水

    1.0 min,0.1 mol/L NaOH

    1.5 min,水

    1.0 min,0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30

    室溫存儲柱子于運行緩沖液或水中。

    展開


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