CE 分離來自復合體混合物如蛋白酶解產物的特定多肽尤其有用。以下的方案闡述使用低壓樣品注射的 P/ACE 5000 CE 儀器(Beckman) 的用法。但其他儀器也可以依據制造商的操作指南進行同樣的分離。
實驗材料 | |
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試劑、試劑盒 | 0.05 mol/L 和 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.30 存儲于 4℃)0.1 mol/L 氫氧化鈉 |
儀器、耗材 | |
實驗步驟 | 1. 用以下溶液沖洗進行預處理毛細管: 10 倍柱體積的 0.1 mol/L NaOH,在低壓(0.5 lb/in2)下 10 倍柱體積的水 4 倍柱體積的 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30。 存儲柱于 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30,25℃。 2. 將 10 nmol (約 300 g) 溶于 10 ml 的 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30,制備多肽混合物。以每管 100 μl 凍存未用的混合物。 3. 在 0.5 lb/in2,10 s 內用低壓注射上樣 10~20 nl 樣品。 4. 使用以下條件分離多肽混合物: 電解質:0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.3 探測波長:200 nm 溫度:25℃ 電壓:25 kV 5. 用以下溶液清洗柱子: 0.5 min,水 1.0 min,0.1 mol/L NaOH 1.5 min,水 1.0 min,0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30 室溫存儲柱子于運行緩沖液或水中。 |