營養要求比一般細菌高，除基礎營養物質外還需加入10～20%人或動物血清以提供支原體所需的膽固醇。最適pH7.8～8.0之間，低于7.0則死亡，但解脲支原體最適pH6.0～6.5。 大多數兼性厭氧，有些菌株在初分離時加入5%CO2生長更好。生長緩慢，在瓊脂含量較少的固體培養基上孵育2～3天出現典型的“荷包蛋樣”菌落：圓形（直徑10～16um），核心部分較厚，向下長入培養基，周邊為一層薄的透明顆粒區。此外，支原體還能在雞胚絨毛尿囊膜或培養細胞中生長。 繁殖方式多樣，主要為二分裂繁殖，還有斷裂、分枝、出芽等方式，蓋因缺乏細胞壁造成分裂時二個子細胞大小均所致。同時，支原體分裂和其DNA復制不同步，可形成多核長絲體。