1.bigdye測序反應試劑盒 主要試劑是bigdye mix,內含pe專利四色熒光標記的ddntp和普通dntp,amplitaq na polymerase fs,反應緩沖液等。
2.pgem-3zf (+) 雙鏈dna對照模板 0.2g/l,試劑盒配套試劑。
3.m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt,3.2μmol/l,即3.2pmol/μl,試劑盒配套試劑。
4.dna測序模板 可以是pcr產物、單鏈dna和質粒dna等。模板濃度應調整在pcr反應時取量1μl為宜。本實驗測定的質粒dna,濃度為0.2g/l,即200ng/μl。
5.引物 需根據所要測定的dna片段設計正向或反向引物,配制成3.2μmol/l,即3.2pmol/μl。如重組質粒中含通用引物序列也可用通用引物,如m13(-21)引物,t7引物等。
6.滅菌去離子水或三蒸水。
7.0.2ml或和0.5ml的pcr管 蓋體分離,pe公司產品。
8.3mol/l 醋酸鈉(ph5.2) 稱取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸餾水中,冰醋酸調ph至5.2,定容至100ml,高壓滅菌后分裝。
9.70%乙醇和無水乙醇。
10.naac/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混勻,室溫可保存1年。
11.pop 6測序膠 abi產品。
12.模板抑制試劑(tsr) abi產品。
13.10×電泳緩沖液 abi產品。
14.abi prism 310型全自動dna測序儀。
15.2400型或9600型pcr儀。
16.臺式冷凍高速離心機。
17.臺式高速離心機或袖珍離心機。