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  • 發布時間:2020-06-16 14:51 原文鏈接: 誘導多能干細胞毒性實驗(一)

    優勢:
    1.  簡易、快速的通過檢測細胞貼壁面積進行96或384孔板細胞毒性篩選
    2.  按照一般微孔讀板機的簡單流程
    3.  具有細胞影像數據,增加數據可信性

    藥物引起的組織毒性是候選藥物未能進入市場的一個重要原因,因此,安全性和有效性試驗的高度預測分析是提高藥物開發和降低候選藥物抗藥性的關鍵。人源誘導多能干細胞(iPSC)衍生的肝細胞和神經元,表現出成體細胞的典型特征和新陳代謝機制,是作為早期藥物開發過程中高內涵篩選的理想選擇。
    雖然使用熒光和化學發光讀板機檢測標準細胞毒性實驗已經眾所周知,但是,如果使用細胞成像計數儀進行實際細胞觀察會獲得更多有用信息。

    通過標準存活力實驗獲得更多信息

    細胞存活力染料,如Calcein AM,可以用來檢測總化合物在活細胞中的毒性。Calcein AM只在表現出酯酶活性的活細胞內才會發出綠色熒光。iPSC來源的人肝細胞,首先加入不同化合物處理24小時,然后用Calcein AM染色;活細胞圖像使用SpectraMax? MiniMax? Imaging Cytometer獲取(SpectraMax? i3多功能檢測平臺
    的升級選項)。活細胞內的綠色胞漿區域使用SoftMax? Pro軟件內的細胞增殖分析模塊進行鑒定(Figures 1 和 2), IC50值測定使用軟件內的曲線擬合函數直接算出(Figure 3)。

    Figure 1. 存活力染料的活細胞檢測

           

            

    Calcein AM染色的活細胞,使用SoftMax Pro軟件內的細胞增殖分析模塊進行鑒定,此分析采用計算活細胞覆蓋面積占孔面積的百分比。右側的紫色蒙圖(masks)顯示出活細胞的分布,可在左側圖片內觀察到。

    Figure 2. 快速檢測細胞增殖率

    在肝細胞毒性實驗中,通過熱圖數據結果可以快速顯示哪種化合物具有細胞毒性。紅色孔是細胞貼壁最多的,而藍色孔則是貼壁最少的,圖中可看出E-H排是細胞毒性最高的,A,M-P排則是無細胞的孔。


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