谷胱甘肽的測定實驗

谷胱甘肽（glutathiose,r-glutamyl cysteingl +glycine,GSH）是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。存在于幾乎身體的每一個細胞。

實驗方法
雙抗夾心ELISA法
免疫組織法
實驗方法原理 先將康體包被于反應板上，加入待測抗原，然后再加入酶標康體，顯色后即可測得抗原含量。 
實驗材料 抗體 
試劑、試劑盒 碳酸鹽緩沖液 Na2CO3 磷酸鹽緩沖液 NaCl KCl TMB 二甲基亞砜 牛血清蛋白 
儀器、耗材 酶標儀 培養箱 
實驗步驟 一、材料準備

1.  包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸鹽緩沖液：Na2CO3 0.159 g，NaHCO3 0.294 g，用蒸餾水溶解后，定容至100 ml。

2.  PBS-T洗滌液：0.01mol/ pH7.4磷酸鹽-氯化鈉緩沖液：NaCl 8.0 g，KH2PO4 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 2.9 g，KCl 0.2 g，吐溫-20 0.5 ml，用蒸餾水溶解后，定容至1000 ml。

3.  底物溶液3，3’，5,5‘-四甲基聯苯胺（TMB）貯存液及應用液：

（1）0.1 mol/l pH6.8 PBS：Na2HPO4·12H2O 1.09 g，NaH2PO4·H2O 6.05 g，蒸餾水溶解后定容至500 ml，4℃保存備用。

（2）TMB貯備液：TMB 60 mg 溶于10 ml 二甲基亞砜（DMSO）中4℃保存備用。

（3）TMB應用液：臨用前取0.1 mol/l pH6.0 PBS 10 ml，TMB貯備液100 ul，30%H2O2 15 ul 混勻即可。

二、實驗步驟

1.  抗體包被

（1）抗體用包被液稀釋至20 ug/ml，加入聚苯乙烯反應板中每孔100 ul，加蓋后放4℃過夜。

（2）傾去孔內液體，加入洗滌液后靜置3 min，傾盡洗滌液，重復洗滌3次。

（3）將反應板口在吸水紙上，以除盡液體。

2.  封閉：每孔加入200 ul封閉液，37℃孵育60 min，然后洗滌3次。

3.  加入待測血清，37℃溫育1~2 h，洗滌3次。用稀釋液作對照孔，標準曲線的制備是用不容稀釋度的純GST-π。

4.  加酶標抗體：按要求稀釋抗GST-π-IgG-HRP，每孔100 ul，37℃溫育1 h，然后洗滌5次，扣在吸水紙上吸干水分。

5.  顯色：加入TMB應用液，置室溫反應15~30 min，加入50 ul 2 mol/l H2SO4，穩定3~5 min，即可比色。

6.  比色：用酶標儀，以PBS-T孔為對照，波長450 nm，測各孔光吸收度（A），查標準曲線，即可測得GST-π含量。