質粒的轉化是指將質粒或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。將連接產物轉化到感受態細胞中，實現重組克隆的增殖，便于后續分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）篩選目的細胞。
| 實驗方法原理 | 熱激法：大腸桿菌在0 ℃ CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基－鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，經42 ℃短時間熱沖擊處理，促進細胞吸收DNA復合物，在豐富培養基上生長數小時后，球狀細胞復原并分裂增殖。在被轉化的細胞中，重組子基因得到表達，在選擇性培養基平板上可挑選所需的轉化子。 |
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| 實驗材料 | 外源片段與載體的連接產物大腸桿菌感受態細胞 |
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| 試劑、試劑盒 | X-galAmpLA培養基水抗生素 |
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| 儀器、耗材 | 培養皿滅菌鍋離心管搖床 |
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| 實驗步驟 | 1. l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（100 mg/ml），250 ml制備選擇性培養基平板：在融化的250 ml LA培養基中250 mI PTG (200 mg/ml)，混勻后倒入滅菌培養皿中；
2. 取出3管制備好的感受態細胞，放在冰上融化；
3. 每100 ul感受態細胞加入約20 ng質粒DNA，3管分別加連接產物、標準超螺旋質粒DNA（陽性對照）及不加入任何DNA（陰性對照），用移液器輕輕吸打均勻，在冰上放置30分鐘；
4. 熱擊：將離心管放置42 ℃水浴，熱擊90秒，注意：勿搖動離心管；
5. 冰鎮：快速將離心管轉移至冰浴，放置1－2分鐘；
6. SOC培養基，在37 ℃搖床溫和搖動溫育45分鐘，使細菌復蘇；復蘇：每管加400 ul
7. 布皿：取適當體積均勻涂布于含有IPTG、X-gal、抗生素（Amp）的LA平板；
8. 培養：倒置培養皿，于37 ℃培養12－16小時 即可觀察到藍白相間的菌落（其中白色菌落為含有外源插入片段的轉化子，藍色菌落是載體自連的轉化子） 展開 |
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| 注意事項 | 1、利用氨芐青霉素抗性篩選轉化子時，用轉化細胞鋪平板的密度要低（90mm平板上不得超過105個菌落），同時37℃培養不應超過20小時，具氨芐青霉素抗性的轉化體可將?－內酰胺酶分泌到培養基中，迅速滅活菌落周圍的抗生素，從而導致對氨芐青霉素敏感的衛星菌落的出現。
2、 鑒定轉化子中是否含有外源DNA片段常用的方法有：
1) ?互補；
2) 雜交篩選；
3) 插入失活（一些老質粒如pBR322等）;
4) 小量提取質粒酶切檢測、PCR檢測 展開 |
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| 其他 | 轉化后，可以根據質粒上帶有的某種特殊基因的表達來鑒定菌落，最常用的有：抗藥性基因的表達，比如質粒帶有氨芐抗性基因，能在AMP平板上長的一般可以初步判斷為轉化成功的菌；還有就是顯色篩選，比如質粒上的LacZ基因表達，間接促使添加了X-gal的培養基變藍，綠色熒光蛋白基因表達后菌落發熒光等。 |
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