聚乙二醇沉淀法質粒DNA
氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA
(一)聚乙二醇沉淀法提取質粒DNA
1)將核酸溶液所得]轉入15mlCorex 管中，再加3ml 用冰預冷的5mol/L LiCl溶液，充分混勻，用合適轉頭于4℃下以10 000轉/分離心10分鐘。LiCl可沉淀高分子RNA。
2)將上清轉移到另一30mlCorex管內，加等量的異丙醇，充分混勻，用SorvallSS34轉頭(或與其相當的轉尖)于室溫以10 000轉/分離心10分釧，回收沉淀的核酸。
3)小心去掉上清，敞開管口，將管倒置以使最后殘留的液滴流盡。于室溫用70%乙醇洗滌沉淀及管壁，流盡乙醇，用與真空裝置相連的巴其德吸管吸去附于管壁的所有液滴，敞開管口并將管侄置，在紙巾上放置幾分鐘，以使最后殘余的痕量乙醇蒸發殆盡。
4)用500μl含無DNA酶的胰RNA酶(20μg/ml )的TE(pH8.0)溶解沉淀，將溶液轉到一微量離心管中，于室溫放置30分鐘。
5)加500μl含13%(w/v)聚乙二醇(PEG 8000)的1.6mol/L NaCl，充分混合，用微量離心機于4℃以12000g離心5分鐘，以回收質粒DNA。
6)吸出上清，用400μl TE(pH8.0)溶解質粒DNA沉淀。用酚、酚:氯仿、氯仿各抽1次。
7)將水相轉到另一微量離心管中，加100μl 10mol/L乙醇銨，充分混勻，加2倍體積(約1ml)乙醇，于室溫放置10分鐘，于4℃以12 000g離心5分鐘，以回收沉淀的質粒DNA。
8)吸去上清，加200μl處于4℃以12 000g離心2分鐘。
9)吸去上清，敞開管口，將管置于實驗桌上直到最后可見的痕量乙醇蒸發殆盡。
10)用500μl TE(pH8.0)溶解沉淀1:100稀釋[用TE(pH8.0)] 后測量OD260，計算質粒DNA的濃度(1OD260=50μg質粒DNA/ml)，然后將DNA貯于-20℃。