賽默飛世爾科技CPSA2013報告集錦

　　2013年4月24日，第四屆CPSA上海年會在上海淳大萬麗酒店舉行。來自國際知名藥企、跨國大制藥公司、生物醫藥研究所和高校的高管、專家、學者百余人參加了本次會議。賽默飛世爾科技作為金牌贊助商參加會議，并圍繞其在生物醫藥領域的創新技術給與會者帶來了多場精彩報告。

賽默飛世爾科技展臺

　　4月25日，CPSA 2013大會開幕式當天中午賽默飛舉行了午餐技術交流會。午餐會期間，來自賽默飛世爾科技應用工程師劉綠葉先生帶來了題為《藥物分析應用領域中質譜高效前端技術》的精彩報告。

賽默飛午餐研討會現場

賽默飛世爾科技應用工程師 劉綠葉先生

　　報告中，劉綠葉先生主要講了三部分內容：DGPLC MSMS液相色譜質譜聯用儀介紹，采用DGPLC MSMS閥切換技術分析藥物中的有關物質以及采用DGPLC MSMS外接抑制器分析蛋白和多肽類化合物。

　　劉先生首先介紹了Ulitimate3000雙三元多功能液相色譜與TSQ Vantage 三重四級桿質譜儀。TSQ Vantage是最靈敏的三重四級桿質譜儀，因為有更多加熱的氮氣作為輔助氣流，增強了高流量下的脫溶劑效果；真空鎖定技術，維護方便且離子遷移效率最大，從而得到了更高的靈敏度。采用TSQ Vantage柱切換技術可以分析藥物中的有關物質。人用藥品注冊技術要求國際協調會議要求表觀含量大于0.1%的雜質就需要進行定性分析，使用TSQ Vantage分析條件簡單且靈敏度高，方便操作。

　　CSRS抑制器是一種常用于離子色譜中降低淋洗液背景電導的裝置，中間含有一層強陰離子交換膜，這樣，淋洗液中的強酸透過膜被再生液中和生成弱酸，再生液形成鹽 。劉先生還介紹了TSQ Vantage外接抑制器來分析蛋白和多肽類化合物的解決方案。采用TFA-Fix技術或柱后抑制器抑制技術，總體的優勢體現在TFA-Fix技術分析室，部分多肽提高1.00-1.77倍響應值；柱后抑制器抑制技術分析時，平均提高5倍，部分多肽提高17倍響應值；DGLC系統全自動實現質譜前段的TFA-Fix技術和柱后抑制器抑制技術，保證LC與MS的完美聯用。

　　此外，賽默飛在生物分析技術發展和目標蛋白質組學分會場也有多場報告。

賽默飛世爾科技 江崢女士

　　來自賽默飛世爾科技的江崢女士在生物分析技術發展分會場中介紹了題為《使用精確質量數實現生物制劑中低檢出限的激素定量》的報告。

　　江崢女士從萃取離子色譜(EIC)圖、采集模式、開發方法、特異性等多個方面比較了HiRes質譜和三重四極桿質譜在定量分析中的差異。HiRes質譜采用MS/MS2的全掃描模式，可以分析質量范圍內所有的共流出化合物，不需要SRM優化，能夠分離共流出物的等壓干擾，應用范圍包括目標化合物定量、目標或非目標化合物的篩選和確認、同時定量/定性分析。而QqQ質譜采用MRM/SRM模式，只能檢測一定數量的化合物，有來自基質的潛在干擾，使用范圍包括目標化合物的篩選和定量。在定量工作流程中，HiRes質譜也比QqQ簡單，HiRes質譜設置質量范圍和分辨率之后，儀器可以自動進行數據采集、分析，直至得到報告。HiRes質譜使用HRAM創新技術，節省分析時間；可同時進行定量/定性分析。生物分析時使用精確質量數主要有三大優點，第一，高分辨率下提供精確質量，確保分析的高特異性；第二，使用理論精確質荷比，需要較少的方法開發；第三，單一質譜平臺可同時定量/定性分析。

　　隨后江崢女士介紹了賽默飛的Orbitrap技術。Orbitrap質譜中采用了和離子阱或FT-ICR相似的技術。Q Exactive質譜儀于2011年ASMS推出，是首臺推出市場的臺式LC-MS/MS Orbitrap儀器。它被看做是Exactive 產品線基礎上一個互補擴展，相比Exactive，Q Exactive 有更加靈敏的離子源，有更高的掃描速度。江崢女士以五種類固醇為例介紹了基于AM的定量方法的建立，并評價了精確定量的靈敏度、線性范圍和重現性。實驗證明，Q Exactive 串聯高分辨率質譜分辨率達到140k@m/z 200，分析質量準確度<3ppm(外標)，維持穩定質量準確度的情況下快速極性轉換，在血漿樣品中的五種類固醇檢測靈敏度達到pg/mL濃度級別。

賽默飛世爾科技 郝志奇女士

　　來自賽默飛世爾科技的郝志奇女士在蛋白質組學分會場中帶來了題為《高分辨質譜分析目標蛋白質的獨立數據方法》的精彩報告。

　　蛋白質從發現到目標物的定量有其一套完整的定量工作流程，而目前遇到的挑戰就是如何保證復雜生物基質中更多蛋白質或多肽的重復、精確定量。SRM模式高背景噪音、選擇性低、靈敏度低，不適于某些高電荷、高質量數的蛋白質。HRAM數據系統擁有高達140k的分辨率，<5ppm的質量準確度。Q Exactive的HR/AM目標物定量方法中包含平行反應監測(PRM)、SIM和數據獨立采集DIA軟件。郝志奇女士比較了DDA和DIA，結果顯示，DIA方法具有以下優勢：無需目標物列表，很高的通量(達到100s-1000s)，更少的方法開發，可以從舊數據中檢索出新的目標物。但DIA同時也有一些局限性：由于干擾的背景離子，使得目標物采集方法靈敏度降低10倍，不能匹配快速UHPLC分離，必須要有一個參考的譜庫。

　　在Q Exactive 上運行DIA實驗有很多優勢：通過減少干擾，采用高分辨率設計來獲得更高精度的定量數據；可以靈活使用不同的質量范圍和分辨率組合來適應不同的研究需求；實現MSX-DIA實驗的唯一平臺，比一般的DIA實驗有更高的選擇性。復雜樣品中擁有更好的定量性能；創新的Easy-Spray離子源和Easy-Spray柱能夠穩定多樣品運行時肽信號強度和保留時間，以保證定量結果的重復性。

賽默飛世爾科技 聶愛英博士

　　來自賽默飛世爾科技的聶愛英博士在生物分析技術開發分會場帶來題為《高分辨質譜表征抗體藥物分子量、肽序列和修飾位點》的報告。主要介紹了抗體藥物、Orbitrap質譜儀和Q Exactive分析抗體藥物的分子量、肽序列和修飾位點三個方面的內容。

　　FDA和EMA已經證實的lgG抗體藥物有純抗體、放射免疫偶聯、抗體藥物共軛(ADCs)、特異性抗體、Fab片段、Fc-融合蛋白質/肽、免疫細胞因子等。聶愛英博士以單克隆抗體MAb為例介紹了賽默飛Orbitrap儀器抗體檢測的方法和優勢。單克隆抗體MAb分子量約150k Da，有2個輕鏈和2個重鏈，多個二硫鍵，由多種糖形的糖蛋白組成。MAb有多重修飾方式，可以脫酰胺、氧化、二硫化、序列截斷、聚合等。目前在MAb開發工作流程涉及了藥物發現、臨床前開發、臨床開發、商品化前后的整個過程。MAb分析包括產品滴度、純度和雜質、產品ID、完整質量序列、電荷變化、碎片、修飾、DMPK/代謝物和聚糖等，傳統的分析方法有SDS-PAGE、HPLC、免疫組化分光光度法。傳統方法在選擇性、特異性、靈敏度、線性范圍、通量和穩定性中存在很多挑戰。

　　Orbitrap成為MAb分析的一種突破性技術，其擁有高分辨率，可以達到140k FWHM@200 m/z和240k@400m/z；內標<1ppm和外標<2ppm的高精度；很好的正負極轉換穩定性和高通量，一次進樣獲得更多信息；小于fmol的靈敏度。目前Orbitrap家族有落地式LTQ Orbitrap和臺式Exactive兩款產品。在售的LTQ Orbitrap系列有LTQ Orbitrap XL、LTQ Orbitrap Velos Pro、LTQ Orbitrap Elite。在售的Exactive系列有Exactive plus、Q Exactive。聶愛英博士詳細介紹了Q Exactive定量分析MAb的工作流程和獲得的原始MW、解卷積MW、ADC鍵位置、不同的PTM位點。使用Q Exactive可以獲得大于95%的肽圖譜信息。

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