目的：
1、掌握用細胞破碎液裂解菌體細胞，并通過電泳的方法細胞中不同分子量質粒的方法；
2、從實驗六的氨芐青霉素抗性轉化子中篩選僅含一個拷貝目的基因的重組載體。
原理：
挑選8～10個白菌落接于平板過夜培養。利用破碎細胞緩沖液中的十二烷基硫酸納（SDS）在37℃溶解膜蛋白，使細胞破裂，然后高速離心，將含有質粒DNA的上清夜直接進行上樣、電泳和分離，理論上只要篩選的轉化子足夠多，即可找到僅含一個拷貝目的基因的重組質粒。
挑選8～10個白菌落接于平板過夜培養。利用破碎細胞緩沖液中的十二烷基硫酸納（SDS）在37℃溶解膜蛋白，使細胞破裂，然后高速離心，將含有質粒DNA的上清夜直接進行上樣、電泳和分離，理論上只要篩選的轉化子足夠多，即可找到僅含一個拷貝目的基因的重組質粒。
一、儀器
超凈工作臺；微量可調式移液器；振蕩培養箱；離心機；電泳儀；恒溫水溶箱
二、試劑
LB培養基、Cracking Gel緩沖液[1mol/L Tris-HCl(pH6.8)10ml，20%SDS 10ml，250mmol/L EDTA1.6ml，蔗糖27.2g，1.2%溴酚藍1.67ml，加雙蒸水至200ml。
三、步驟
1、挑取轉化平板上的單菌接種于含相應抗生素的2ml LB中，37℃振蕩培養至A590值為0.6～0.8。
2、取1ml菌液至1.5mlEppendorf管中，離心9000rpm×9min，去盡上清。
3、加入70μl Cracking Gel緩沖液，混勻后，37℃水浴30min以上。
4、離心15000rpm×15min。
5、吸取上清點樣電泳，觀察。
提示：
溴化乙錠含有一個可以嵌入堆積堿基之間的一個三環平面基團。它與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中，大約每2.5個堿基插入一個溴化乙錠分子。當染料分子插入后，其平面基團與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互作用。這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近，導致與DNA結合的染料呈現熒光，其熒光產率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料，而被結合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。在這兩種情況下，被吸收的能量在可見光譜紅橙區的590nm處重新發射出來。由于溴化乙錠-DNA復合物的熒光產率比沒有結合DNA的染料高出20～30倍，所以當凝膠中含有游離的溴化乙錠（0.5μg/ml）時，可以檢測到少至10ng的DNA條帶。
在該染料存在的情況下，線狀DNA的電泳遷移率約降低15%，因此，當需要知道DNA片段的準確大小（如DNA限制酶酶切圖譜的鑒定），凝膠應該在無EB情況下電泳，電泳結束后用EB染色。
由于溴化乙錠具有一定的毒性，實驗結束后，應對含EB的溶液進行凈化處理再行棄置，以避免污染環境和危害人體健康。
（1）對于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下處理：
①將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml；
②加入一倍體積的0.5mg/ml KMnO4,混勻，再加入等量的25mol/L HCl,混勻，至室溫數小時；
③加入一倍體積的2.l5mol/L NaOH,混勻并廢棄。
（2）EB含量小于0.5mg/ml 的溶液可如下處理：
①按1mg/ml的量加入活性炭，不時輕搖混勻，室溫放置1h；
②用濾紙過濾并將活性炭與濾紙密封后丟棄。