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  • 發布時間:2020-07-20 17:13 原文鏈接: 轉基因技術的發展及其在轉基因動植物的應用(一)

    轉基因技術的發展

    自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來,我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式:針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用,從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾率且無人類控制性的被動模式大大阻礙了農業的發展,迫切地需要一門新興科學。自遺傳學創立后改觀了這一境遇,動植物育種采用人工雜交的方法進行優良基因的重組和外源基因的導入,從而實現遺傳改良。

    因此,轉基因技術與傳統技術在本質上都是通過獲得優良基因進行遺傳改良。但在基因轉移的范圍和效率上,轉基因技術與傳統育種技術區別于兩點:首先,傳統技術一般只能在生物種內個體間實現基因的轉移,而轉基因技術所轉移的基因則不受生物體間親緣關系的限制;第二,傳統的雜交和選擇技術一般是在生物個體水平上進行,操作對象是整個基因組,所轉移的是大量的基因,不可能準確地定位于某個基因進行操作和選擇,對后代的表型預見性較差。而轉基因技術所操作和轉移的是經過明確定義的基因,功能清楚,可準確預測后代。故轉基因技術是對傳統技術的發展和補充,兩者的結合可以極大地提高動植物品種改良的效率。

    在轉基因發展的過程中,從早期單純進行科研研究拓展到目前研究和應用齊頭并進,生物學科與其他領域的交叉有著不可忽略的重要作用,如生物物理產生的顯微鏡技術,以及日益發展的電穿孔技術,極大地促進了科研走向應用。

    在當今轉基因領域中電穿孔技術的應用范圍最廣,早在1982年Neumann.E將外源DNA在電場條件下導入小鼠真核細胞[1],從而實現了基因重組和外源基因的功能研究。隨之這一技術得到了廣泛的運用,如細菌、酵母、植物和動物細胞的體外應用如Simon, J. R[2];以及器官植入、皮膚損傷修復的電化學療法、疫苗的注射等體內體外臨床應用,如S.Tollefsen, et al[3];小分子或大分子物質功能性研究;研制轉基因動物、轉基因植物新品種等,本文下文就將特別介紹轉基因動植物的應用。

    電穿孔技術主要包括電轉染電融合:電轉染是利用脈沖電場將外源DNA導入細胞中,當細胞處于高壓電場時,瞬時電脈沖可將細胞膜穿孔產生可逆性孔徑,從而DNA進入細胞與染色體整合;電融合是利用高強度的電場脈沖,引起相鄰的細胞融合。

    電穿孔技術的簡單原理與應用如下圖:


    圖1:電穿孔前后細胞質膜的變化示意圖


    圖2:電穿孔原理和應用示意圖


    轉基因動物
    1981年,第一次成功地將外源基因導入動物胚胎,創立了轉基因動物技術。1982年獲得轉基因小鼠,轉入大鼠的生長激素基因,使小鼠體重為正常個體的二倍,因而被稱為“超級小鼠”,這些開拓了轉基因克隆動物–無性生殖技術。1997年英國I. Wilmut等,用綿羊乳腺細胞的細胞核移植到去細胞核的卵細胞中,成功得到了克隆羊“多莉”,證實了高等哺乳動物也可以突破有性生殖繁殖后代。

    核顯微注射法則是動物轉基因技術中早期最常用的方法。它是在顯微鏡下將外源基因注射到受精卵細胞的原核內,注射的外源基因與胚胎基因組融合,然后進行體外培養,最后移植到受體母畜子宮內發育,這樣分娩的動物體內的每一個細胞都含有新的DNA片段。然而這種方法的缺點是效率較低、位置效應(外源基因插入位點隨機性)造成的表達結果的不確定性、動物利用率低等,在反芻動物還存在著繁殖周期長,有較強的時間限制、需要大量的供體和受體動物等特點。


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