軟瓊脂克隆化借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長，而達到克隆化，具體操作如下：
1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。
2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。
3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾細胞。
4．每塊平皿加10ml，于室溫中凝固。
5．DMEM中的細胞與DMEM—瓊脂1:1混合，將細胞瓊脂混合物2ml鋪于凝固的平板上，使其全部覆蓋。
6．放入CO2箱飽和濕度，37℃培養10天。
7．用PBS配制0.6%瓊脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保溫情況下取一試管，迅速加入0.1ml25%羊紅血球，0.2ml豚鼠補體，2.7ml0.6%瓊脂糖。
8．用3ml瓊脂糖—羊紅血球混合液覆蓋克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。從克隆上部溶解羊紅血球的溶血范圍，可篩選抗羊紅血球Ig。