辣椒粉辣度的快速檢測（二）

辣度（SHU）計算用Seoville指數法。

SHU=[X1+X2]x（16.1×103 ）+[Xl+X2]÷90％×10％×（9.3×103 ）

式中：辣椒素總量中辣椒素和二氫辣椒素含量為90％。每mg辣椒素或二氫辣椒素相當于16.1×103 SHU，其余辣椒素lmg相當于9.3xl03SHU。注：國際辣椒市場采用的是美國的辣度單位“SHU”，銷到國外的辣椒必須提供辣椒的辣度。

圖6.  辣椒粉樣品1 HPLC-UV分離分析色譜圖，1為降二氫辣椒素（根據文獻初步判斷，需驗證）、2為辣椒素（13.199 mins）、3為二氫辣椒素（18.7305 mins）

樣品提取及方法

準確稱取兩份辣椒粉2號樣品，每一份5.000 g（精確到0.001g）。分別裝入兩個100 ml燒杯中，標記為2-1和2-2，以此作為平行實驗。加入甲醇：四氫呋喃（1:1）混合溶液25 ml，用封口膜封口并在頂部扎些小孔。將燒杯放入60℃水浴中超聲提取30 mins。然后，4000 r/min離心6 mins，用濾紙過濾并收集濾液。將濾紙和離心后的沉淀繼續用25 ml的甲醇：四氫呋喃（1:1）混合溶液60 ℃水浴中超聲提取10 mins，共重復兩次。合并濾液，并用Labtech旋轉蒸發儀濃縮至10~20 ml，用甲醇：四氫呋喃（1:1）混合溶液定容至50 ml。最后，0.45 μm微孔濾膜過濾，并吸取20 μl進行HPLC-UV分析。同樣的方法處理辣椒粉3號樣品，得到樣品3-1和3-2。

圖7.  辣椒粉樣品2 HPLC-UV分離分析色譜圖，1降二氫辣椒素（根據文獻初步判斷，需驗證）、2辣椒素（13.28 mins）、3二氫辣椒素（19.03 mins）

HPLC-UV分析

按照前面的色譜條件對辣椒素和二氫辣椒素標準品進行保留時間定性分析，對辣椒素和二氫辣椒素混合標樣進行外標峰面積歸一化法分析，建立標準曲線。然后對辣椒粉樣品的超聲提取物1-1、1-2、2-1、2-2、3-1、3-2、4-1、4-2進行HPLC分析，并根據峰面積進行定量分析含量。

結果與討論

對辣椒素和二氫辣椒素單標和混標分別進行保留時間定性實驗，實驗結果如圖2所示。從圖中可知，可以實現辣椒素和二氫辣椒素標準品的基線分離，并初步通過保留時間判斷各自的色譜峰。

圖8.  辣椒粉樣品3 HPLC-UV分離分析色譜圖。1降二氫辣椒素（根據文獻初步判斷，需驗證）、2辣椒素（13.1785 mins）、3二氫辣椒素（18.8855 mins）

為了進一步增加實驗結果的可靠性，將100ppm的辣椒素和二氫辣椒素混合標樣進行5次連續進樣，考察色譜分離的重現性，結果為辣椒素的RSD為0.212527%，二氫辣椒素的RSD為0.103526%。

本實驗還采用外標面積歸一化法，對濃度為20、40、60、80、100 ppm的混合標樣進行分離分析，并繪制標準曲線，結果如圖4和圖5所示。         

從圖中可以得出在0~100ppm范圍內辣椒素和二氫辣椒素有很好的線性相關性。其中，辣椒素的線性回歸方程為Y=6868+1.098e+004x，相關系數為0.999762；二氫辣椒素的線性回歸方程為Y=136.2+5872x，相關系數為0.999403。

圖9.  辣椒粉樣品4 HPLC-UV分離分析色譜圖，沒有檢測出辣椒素和二氫辣椒素類物質

辣椒粉樣品的HPLC-UV分析

將辣椒粉樣品1~4分別進行HPLC-UV分析，每個樣品都進行2個平行實驗，并通過面積歸一化法計算得出辣椒素和二氫辣椒素的含量。圖6~9分別為4個樣品的分析譜圖。

從圖中看出，樣品1的辣椒素平均含量為0.2232 mg/g（RSD=1.0246%）；二氫辣椒素含量為0.2936 mg/g（2.6079%），辣度SHU為8855.192。

樣品2中辣椒素平均含量為0.40087 mg/g（RSD=4.4426%）；二氫辣椒素含量為0.52231 mg/g（RSD=6.5592%）。辣度SHU為15817.13。

樣品3中辣椒素平均含量為0.7505 mg/g（RSD=2.4007%）；二氫辣椒素含量為0.7974 mg/g（RSD=6.4527%）。辣度SHU為26520.93。

圖10.  辣椒粉1~4樣品提取物HPLC色譜疊加圖

樣品4中不含有辣椒素和二氫辣椒素。

1降二氫辣椒素（根據文獻初步判斷，需驗證）、2辣椒素（13.28 mins）、3二氫辣椒素（19.03 mins）。

結論

將四種樣品的色譜圖疊加在一起得到圖10。通過標準曲線法定量，辣椒素的線性回歸方程為Y=6868+1.098e+004x，相關系數為0.999762；二氫辣椒素的線性回歸方程為Y=136.2+5872x，相關系數為0.999403。最后計算得出：樣品1辣度SHU為8855.192，其中辣椒素為0.2232 mg/g，RSD為1.0246%，二氫辣椒素為0.2936mg/g，RSD為2.61%；樣品2辣度SHU為15817.13，其中辣椒素為0.4009mg/g，RSD為4.44%，二氫辣椒素為0.5223 mg/g，RSD為6.56%；樣品3辣度SHU為26520.93，其中辣椒素為0.7505 mg/g，RSD為2.4%，二氫辣椒素為0.7974 mg/g，RSD為6.45%；樣品4中沒有檢測到辣椒素和二氫辣椒素。每個樣品重復進樣3次，18個樣品中辣椒素保留時間的RSD（n=18）為0.52%；二氫辣椒素保留時間的RSD（n=18）為0.79%。此方法簡便快捷、靈敏度高、線性范圍寬、重現性良好，滿足GB/T 21266-2007規定的獨立實驗結果間RSD不能高于10%的要求。