透化細胞和退化細胞器中蛋白質的磷酸化實驗

胞外緩沖液 胞內緩沖液 透化緩沖液 標準裂解緩沖液 裂解緩沖液 SDS-PAGE 加樣緩沖液 雙向-PAGE 裂解緩沖液

這些試劑在后面許多地方要用到，應在進行下述實驗前配好。

1. 胞外緩沖液（pH 7.2，37℃）

110 mmol/L NaCl

10 mmol/L KCI

1 mmol/L MgCl₂

1.5 mmol/L CaCl₂

30 mmol/L HEPES

10 mmol/L 葡萄糖

過濾滅菌，4℃ 保存可達 1 個月。

2. 胞內緩沖液（pH7.4，37℃）

25 mmol/L NaHCO₃

120 mmol/L KCl

1 mmol/L KH₂PO₄

10 mmol/L MgCl₂

20 mmol/L HEPES

10 mmol/L 葡萄糖

過濾滅菌，4℃ 保存可達 1 個月。

3. 透化緩沖液（pH7.4，37℃ )

120 mmoI/L KCl

25 mmol/L NaHCO₃

5 mmol/L HEPES

10 mmol/L MgCl₂

1 mmol/L KH₂PO₄

1 mmol/L EDTA

30 μmol/L CaCl₂

該緩沖液含有 100 nmol/L 游離鈣離了。過濾滅菌，4℃ 保存幾個月。

4. 標準裂解緩沖液（pH 7.4，37℃)

50 mmol/L HEPES

100 mmol/L NaCl

2 mmoI/L EDTA

2 mmol/L EGTA

50 mmol/L NaF

10 mmol/L β-磷酸甘油

1 mmol/L Na₃VO₄

1% NP-40 或 Triton X-100

4℃ 保存可達 6 個月。

5. 2X 裂解緩沖液（pH 7.4，4℃）

100 mmol/L HEPES

200 mmol/L NaCl

40 mmol/L EDTA

4 mmol/L EGTA

100 mmol/L NaF

20 mmol/L β-磷酸甘油

2 mmol/L Na₃VO₄

2% NP-40 或 Triton X-100

為了螯合激酶反應中過剩的鎂，該緩沖液含 10X EDTA。4℃ 保存可達 6 個月。

6. 2X SDS-PAGE 加樣緩沖液

0.125 mol/L Tris-HCl ( pH 6.8) 室溫   4ml

10% SDS (w/v)                                4ml

甘油                                               1ml

β-巰基乙醇                                      0.4ml

水                                                  0.6ml

溴酚藍                                           20mg

7. 雙向-PAGE 裂解緩沖液

20 mmol/L Tris-HCl ( pH 8.0)

0.3% SDS (w/v)

1% β-巰基乙醇（v/v)

8. 雙向-PAGE 加樣緩沖液

尿素                                                   6g

NP-40                                                4ml

40% 在所需 pH 范圍內的兩性電解質     0.5ml

DIT                                                     0.154g

水                                                      1.12ml

分成小等份 -70℃ 保存可達 1 個月。