取材的基本要求如下:
組織從生物活體取下以后,如果不立即進行及時固定處理,就有可能出現缺血缺氧后的細胞超微結構的改變,如細胞出現細胞器變性或溶解等現象,這些都可造成電鏡觀察中的人為假象,直接影響觀察結果分析,甚至導致實驗失敗。此外,由于處理不當造成組織微生物污染,導致細胞的超微結構結構遭受破壞。
因此,為了使細胞結構盡可能保持生前狀態,取材成敗是關鍵,取材成功的關鍵在于操作者必須要注意把握“快、小、冷、準”四個取材要點。
(1).快:就是指取材動作要迅速,組織從活體取下后應在最短時間 (爭取在1~2分鐘之內)投入前固定液。對于實驗動物,最好在斷血流、斷氣之前就進行取材,以免缺血缺氧后使細胞代謝發生改變而破壞細胞的超微結構。當然,最好是采用灌注固定法。為了使前固定的效果更佳,組織塊要充分和固定液混合,應采用振蕩固定10分鐘以上,有條件的可采用微波固定法固定。
(2).小:由于常用的固定劑滲透能力較弱,組織塊如果太大,塊的內部將不能得到良好的固定。因此所取組織的體積要小,一般不超過1mm3。為便于定向包埋,可將組織修成大小約1mm×1mm×2mm長條形。
(3).冷:為了防止酶對自身細胞的酶解作用,取材操作最好在低溫(5℃~15℃)環境下進行,這樣可以降低酶的活性,防止細胞自溶。所采用的固定劑以及取材器械要預先在冰箱(5℃)中存放一段時間。
(4).準:就是取材部位要準確,這就要求取材者對所取的組織解剖部位要熟悉,必須取到與實驗要求相關的部位,不同實驗組別間要取相同部位,如需要定向包埋的標本,則要作好定向取材工作。
此外,還要求操作動作輕柔,熟練,盡量避免牽拉、挫傷與擠壓對組織造成的人為損傷。
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