本方案適用于制備噬菌體原種、制備噬菌體顆粒（用來獲得 DNA 進行亞克隆）以及制備 λ 噬菌體臂。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。
| 實驗方法原理 | 本方案適用于制備噬菌體原種、制備噬菌體顆粒（用來獲得 DNA 進行亞克隆）以及制備 λ 噬菌體臂。 |
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| 實驗材料 | λ 噬菌體顆粒懸浮液 |
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| 試劑、試劑盒 | EDTA甘油SM胰 DNase Ⅰ |
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| 儀器、耗材 | Beckman SW41 或 SW28 轉子或相當型號離心管 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液和溶液
EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0 )
甘油（5% 和 40%，V/V ) 于 SM 中
SM
2. 酶和緩沖液
胰 DNase Ⅰ (1 mg/ml)
胰 RNase 于 TE 中（1 mg/ml，pH 7.6)
3. 離心機和轉子
Beckman SW41 或 SW28 轉子或相當型號，配有清亮的離心管（如 Beckman 超亮離心管）
4. 載體和菌株
λ 噬菌體顆粒懸浮液
二、方法
1. 在 Beckman SW41 聚碳酸酯離心管（或相應離心管）中制備甘油分級梯度（每管加 5 ml 噬菌體懸浮液）：
(1) 取 3 ml 含 40% 甘油的 SM，加入至離心管管底。
(2) 在 40% 甘油溶液上小心加入 4 ml 含 5% 甘油的 SM。
(3) 在 5% 甘油的頂層小心加入噬菌體懸浮液，最后用 SM 補滿。
2. 分級梯度于 4℃ 151000 g ( 35000 r/min 于 Beckman SW41 或 SW28 轉子中）離心 60 min。
3. 去上清，每升培養物原液加 1 ml SM 重懸噬菌體沉淀。
4. 加胰 DNaseⅠ和 RNase 至終濃度分別為 5 μg/ml 和 1 μg/ml，37℃ 溫育 30 min。
5. 加 0.5 mol/L 的 EDTA 儲液（pH 8.0) 至終濃度為 20 mmol/L。 |
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