實驗方法原理 牛乳中主要的蛋白質是酪蛋白,含量約為35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物,等電點為4.7。利用等電點時溶解度最低的原理,將牛乳的pH調到4.7時,酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物,除去脂類雜質后便可得到純的酪蛋白。
實驗材料 牛乳
試劑、試劑盒 乙醇 無水乙醚 醋酸 醋酸鈉 乙醇 乙醚
儀器、耗材 離心機 抽濾裝置 精密pH 試紙或酸度計 電爐 燒杯 溫度計
實驗步驟
1. 將100 ml牛乳放到500 ml燒杯中,加熱到40 ℃,在攪拌下慢慢地加入預熱到40 ℃、pH 4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液100 ml。用精密pH試紙或酸度計調pH至4.7。將上述懸乳液冷卻至室溫,離心(3000 r/min)10 min,棄去上清液,或4層紗布過濾,得酪蛋白粗制品。
2. 用少量水洗沉淀3次,離心(3000 r/min)10 min,棄去上清液。
3. 在沉淀中加入30 ml乙醇,攪拌片刻,將全部懸乳液轉移至布氏漏斗中抽濾,用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次,最后用乙醚洗沉淀2次,抽干。
4. 取出沉淀,攤開在表面皿上去除乙醚,干燥后得酪蛋白純品。稱重量,計算百分含量。
其他
1 . 為什么酪蛋白可在等電點pH 下沉淀下來?
2 . 為什么可以用有機溶劑洗滌蛋白質沉淀?
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