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  • 發布時間:2019-03-29 22:17 原文鏈接: 酵母提取物的制備實驗

    實驗方法原理酵母細胞的裂解方法有很多種,包括自溶、壓力破碎(如French加壓罐)、研磨(玻璃珠振蕩)和酶裂解(如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨,是最簡便的方法之一。這對于小體積(如<1mL的)和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測,細胞破碎率一般>95%。
    實驗材料

    新鮮培養的酵母細胞

    試劑、試劑盒

    裂解緩沖液(RIPA緩沖液)PBS

    儀器、耗材

    預冷的玻璃珠

    實驗步驟


    ①在微型離心機上離心3mm,以收集細胞。


    ②去上清,用PBS重懸細胞,再離心3min。


    ③去上清,估算細胞沉淀的體積,向細胞沉淀中加人3倍體積的冰浴裂解緩沖


    液,懸浮后置于冰上。


    ④加入等體積的預冷玻璃珠。


    ⑤劇烈振蕩懸浮液30s。


    ⑥重復步驟⑤,并在相差顯微鏡下觀察,直到大部分酵母細胞被裂解。


    ⑦4℃條件下在小型離心機中離心懸浮液5min,


    ⑧小心地倒出上清,并轉移到另一管中,置于冰上備用。

    展開 
    注意事項

    器材預處理:將玻璃珠在1mol/L的HCl中洗兩遍,然后在裂解緩沖液中洗兩遍。將洗過的玻璃珠液泡于4℃條件下儲存在少量的裂解緩沖液中。


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