新鮮培養的酵母細胞
裂解緩沖液(RIPA緩沖液)PBS
預冷的玻璃珠
①在微型離心機上離心3mm,以收集細胞。
②去上清,用PBS重懸細胞,再離心3min。
③去上清,估算細胞沉淀的體積,向細胞沉淀中加人3倍體積的冰浴裂解緩沖
液,懸浮后置于冰上。
④加入等體積的預冷玻璃珠。
⑤劇烈振蕩懸浮液30s。
⑥重復步驟⑤,并在相差顯微鏡下觀察,直到大部分酵母細胞被裂解。
⑦4℃條件下在小型離心機中離心懸浮液5min,
⑧小心地倒出上清,并轉移到另一管中,置于冰上備用。
器材預處理:將玻璃珠在1mol/L的HCl中洗兩遍,然后在裂解緩沖液中洗兩遍。將洗過的玻璃珠液泡于4℃條件下儲存在少量的裂解緩沖液中。