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  • 發布時間:2019-04-30 21:56 原文鏈接: 酵母菌落直接質粒轉化法

    酵母菌落直接質粒轉化法

    1.用牙簽從平板中挑取單菌落(直徑23mm),轉移到1.5ml的無菌離心管中。

    2.10μl載體DNA100μg)與10μl轉化質粒DNA混合,振蕩均勻。(若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“miniprep DNA”方法制得,則不需加載體DNA)。

    3.0.5ml PLATE溶液,振蕩。

    PLATE溶液:

    40%聚乙二醇(PEG,分子量3350Sigma P 3640

    0.1mol/L 醋酸鋰

    10 mmol/L Tris-HCl pH7.5

    1 mmol/L EDTA

    4.置于實驗臺上,室溫培養4天。

    5.42℃下熱激15分鐘。

    6.800010000r/min離心10秒沉淀細胞,小心棄去上清液,將細胞輕輕懸浮到200μl無菌蒸餾水,使細胞懸浮均勻,再直接將混合液涂選擇平板。


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