酵母菌落直接質粒轉化法
1.用牙簽從平板中挑取單菌落(直徑2~3mm),轉移到1.5ml的無菌離心管中。
2.將10μl載體DNA(100μg)與10μl轉化質粒DNA混合,振蕩均勻。(若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini-prep DNA”方法制得,則不需加載體DNA)。
3.加0.5ml PLATE溶液,振蕩。
PLATE溶液:
40%聚乙二醇(PEG,分子量3350;Sigma P 3640)
0.1mol/L 醋酸鋰
10 mmol/L Tris-HCl (pH7.5)
1 mmol/L EDTA
4.置于實驗臺上,室溫培養4天。
5.置42℃下熱激15分鐘。
6.以8000~10000r/min離心10秒沉淀細胞,小心棄去上清液,將細胞輕輕懸浮到200μl無菌蒸餾水,使細胞懸浮均勻,再直接將混合液涂選擇平板。