實驗材料 酵母
試劑、試劑盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰
儀器、耗材 搖床水浴鍋轉子離心機培養箱
實驗步驟
1. 在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。
2.
轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD培養基，然后接種適量的過夜培養液，再于30℃培養過夜，到細胞密度為1×107
細胞/ml （OD600≈0.3~0.5，依據菌株而定），
為了獲得2~3倍高的轉化效率，用YPAD稀釋培養液至細胞密度為2×106細胞/ml。然后培養生長2~3代（2~4 h）。
3. 培養液在室溫條件下，4 000 g 離心5 min，收集細胞。細胞用10 ml 無菌超純水重懸，然后轉移到一個更小一些的離心管中，再于室溫下，5 000~6 000 g 離心5 min，沉淀細胞。
4. 細胞用1.5 ml 鋰鹽溶液重懸，鋰鹽溶液按下列方法配制，現配現用。
（1）1體積，10×TE緩沖液，pH7.5
（2）1體積，10×乙酸鋰貯液
（3）8體積，無菌超純水
5. 每次轉化時，200 μg 擔體DNA和≤5 μg 轉化DNA一起加入1.5 ml 微量離心管中混勻，DNA的總體積≤20 μl。
6. 往每個離心管加入200 μl 用鋰鹽溶液重懸的細胞懸液，再加入1.2 ml 新鮮配制的 PEG 4000溶液。PEG 4000溶液配方為：
（1）8體積，50%PEG
（2）1體積，10×TE緩沖液，pH7.5
（3）1體積，乙酸鋰貯液
（4）30℃搖蕩溫育30 min。
7. 于42℃熱休克15 min，室溫下離心5 s，細胞沉淀用200 μl~1 ml 1×TE緩沖液重懸，并取其中200 μl 涂布在Difco瓊脂制備的CM省卻成分培養平板上。30℃培養2~5天，直到Difco瓊脂平板上出現轉化子。
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