實驗材料 酵母
試劑、試劑盒 YPDSDS磷酸鉀Na2CO3OPNG
儀器、耗材 水浴鍋培養箱分光光度計漩渦混合器離心機
實驗步驟
1. 按每一個單酵母菌落接種YPD（或適當）的培養基，挑2~3個含lacZ融合蛋白表達質粒的酵母菌于30℃培養過夜，如果融合蛋白在一個質粒上，那么就在選擇該質粒的培養基中培養。
2. 在5 ml 培養基中（或用適當的選擇培養基和誘導條件）接種20~50 μl 過夜培養的培養液。培養細胞至對數生長的中期或晚期：豐富培養基，0.5~1×106細胞/ml 或極限培養基， 2~5×107細胞/ml（OD600=0.5~1.0）。
3. 培養液1 100 g 離心5 min 收集細胞，用等體積的Z緩沖液重懸菌體，并置于冰浴中， 檢査每份樣品的OD600值。
4. 每個樣品設二個反應管（每管1 ml）：
（1）100 μl 細胞懸液與900 μl Z緩沖液混合。
（2）50 μl 細胞懸液與950 μl Z緩沖液混合。
5. 在每個樣品反應管中，用巴斯德吸管滴加1滴0.1%SDS和2滴氯仿，旋渦振蕩10~15 s，在30℃水浴中平衡15 min。
6. 加入0.2 ml 4 mg/ml 的OPNG，在旋渦混合器上振蕩5 s，置30℃水浴中，并開始計時。
7. 當溶液變黃（OD420=0.3~0.7）時，加入0.5 ml 1 mol/l Na2CO3中止反應，記錄下中止反應的時間。
8. 1 100 g 離心細胞5 min 測定上清的OD420和OD550。
9.按下列公式計算半乳糖苷酶的活性（單位U）