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  • 發布時間:2019-10-31 17:42 原文鏈接: 酶標儀

    操作事項

          酶標儀的功能是用來讀取酶聯免疫試劑盒的反應結果,因此要得到準確結果,試劑盒的使用必須規范。許多醫院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結果,操作過程隨意性較大,在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習慣,會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應注意以下事項:

    1.使用加液器加液,加液頭不能混用。

    2.洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染。

    3.嚴格按照試劑盒的說明書操作,反應時間準確。

    4.在測量過程中,請勿碰酶標板,以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。

    5.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部,操作完成后請洗手。

    6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害,請嚴格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。

    7.如果儀器接觸過污染性或傳染性物品,請進行清洗和消毒。

    8.不要在測量過程中關閉電源。

    9.對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差,應根據實際情況及時修改參數,以達到最佳效果。

    10.使用后蓋好防塵罩。

    11.出現技術故障時應及時與廠家聯系,切勿擅自拆卸酶標儀。(擅自拽板是酶標儀損壞的重要原因)


    常識梳理

    1. 為什么酶標儀的標準配置包括405nm,450nm,490nm及630nm四塊濾光片具有紫外功能的酶標儀還配備有340nm.


           目前用于酶聯免疫吸附測定,常使用的標記用酶是辣根過氧化物酶(HRP),對應的底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)。底物在過氧化氫溶液的存在下,經辣根過氧化物酶作用,分別氧化為2,2,&mdash;二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。鄰苯二胺(OPD)的氧化產物DAB,在pH值為5.0左右時,在450nm波長處有大吸收,此時可用450nm的濾光片測定吸光值。當加入強酸作為終止試劑終止反應時,pH值降到接近0,此時大吸收波長移至492nm,此時可用492nm的濾光片測定吸光值。

           四甲基聯苯胺(TMB)的氧化產物聯苯醌,一般在波長為450nm處有大消光系數。使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min,便于檢測。因此,450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。

           除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,雙波長比色主要用于消除非特異干擾的影響。

           如果實驗需要用酶標儀作微量生化測定,就需要擴展紫外檢測功能,此時需要一個340nm波長濾光片。

           總之,以上介紹的是常用的幾個波長的濾光片,用戶還可以根據自己的需求選擇其他波長的濾光片。一般各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,可以滿足用戶的不同需求。

          

         2.酶標儀分類

    A.按照功能的劃分,酶標儀可以分為光吸收酶標儀,熒光酶標儀,化學發光酶標儀多功能的酶標儀.

           光吸收酶標儀是用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測.特定波長的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關系,由此可以用來定性和定量的檢測.光吸收的檢測技術成熟,成本低,操作簡單,但是動態范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強.一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源,發展的主流是LED光源,而紫外/ 可見酶標儀是可以將兩種光源進行切換,適應不同測量波長的需求。

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