一、單鏈載體 DNA 的制備
1. 在 100 ml TE 緩沖液中溶解 1 g 高分子量 DNA,用磁力攪拌器于 4℃ 攪拌過夜。
2. 用大直徑探頭以最大功率超聲處理 30 秒;應將探頭在溶液中持續移動,以保證超聲處理的均一性。
3. 在每次脈沖過后,吸取 100 μl 超聲過的樣品加到 1.5 ml 的微量離心管中,置于沸水浴中 5 分鐘,冰水浴中快速冷卻。
4. 當經過煮沸和快速冷卻的 DNA 樣品能容易地吸取時,分裝 1 ml 和 10 ml 的等份,儲存于 -20℃。一般需經過 3 到 4 次 30 秒的脈沖,DNA 樣品才變得容易吸收。在使用前,將保存的 1 ml 等份樣品煮沸 10 分鐘并在冰水浴中快速冷卻。單鏈載體 DNA 可被煮沸、凍存及再使用 3 到 4 次。
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