1. 將 10 μl 接種物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2,培養過夜。
2. 對一個轉化來說,在微量離心管中用 1.0 ml 滅菌水懸浮一接種環酵母菌。
3. 離心沉淀細胞,將水去掉。
4. 用 500 μl 100 mmol/L 的 LiAc 重懸細胞,30℃ 水浴 15 分鐘。
5. 制備轉化混合物:每個轉化管加 240 μl PEG、36 μl 1.0 mol/L 的 LiAc、25 μl ssDNA、5.0 μl 質粒 DNA 和 45 μl 水。
6. 用微量離心機離心沉淀細胞,去掉 LiAc。
7. 向每個細胞沉淀中加入 350 μl 轉化混合物,劇烈渦旋混勻。
8. 30℃ 水浴 30 分鐘。
9. 42℃ 水浴熱休克 20 分鐘。
10. 用微量離心機最高速度離心 15 秒,去掉轉化混合物。
11. 吸取 1.0 ml 滅菌水加到管中,上下吹打并劇烈渦旋以重懸細胞。
12. 吸取 100 μl 樣品涂布 SC 減樣選擇培養基平板,30℃ 培養 2~4 天。 展開 |