重組蛋白質的大規模生產實驗

發布時間：2019-09-13 13:13 原文鏈接：重組蛋白質的大規模生產實驗

基本方案
堿處理法

實驗材料	重組蛋白質
儀器、耗材	培養瓶過濾器
實驗步驟	1. 在懸浮培養液中培養Sf9細胞，并使之適應無血清培養液。 2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增Sf9細胞，將合適大小的兩孔蓋連接在轉瓶的一個側臂，另用一平蓋接在另一側臂。將一段短管（約6英寸或15 cm）裝在通氣孔中，末端連接一濾器，借助張力器用管索將管子與通氣孔和濾器固牢。 3. 將一段長管（30~60 cm）連接至進氣孔，并在末端連接一濾器，用管索加固，另一段管子連接于濾器的另一端，用管索固牢。管子末端用鋁箔封好。 4. 將與兩孔裝置相對的側壁上的蓋子旋轉90度以松開，高壓滅菌培養瓶1 h。 5. 將適應了無血清培養液的細胞接種于經高壓滅菌的培養瓶中。將培養瓶裝至半滿至全滿之間，加入足夠的無血清培養液以使細胞終密度達到5×10⁵~6×10⁵細胞/ml 至1.5×10⁶細胞/ml。 6. 將培養瓶放在27℃培養箱中的磁力攪拌器上。將攪拌速度設置在80 r/min。從進氣管的末端移去鋁箔，并將它連接到供氣泵。接通泵的電源，使其流量達到500~700 ml/min。 7. 細胞生長至密度約1.5×10⁶細胞/ml。在層流室中將感染復數（MOI）為1~2的病毒通過側臂直接加到培養瓶中。 8. 于27℃將培養瓶置于磁力振蕩器上并通氣，確定溫育培養物的時間。 9. 處理上清得到分泌蛋白或處理細胞得到胞內蛋白。圖1. 配有兩孔蓋裝置的Bellco 旋轉培養瓶展開

實驗材料

重組蛋白質

儀器、耗材

培養瓶過濾器

實驗步驟

1. 在懸浮培養液中培養Sf9細胞，并使之適應無血清培養液。

2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增Sf9細胞，將合適大小的兩孔蓋連接在轉瓶的一個側臂，另用一平蓋接在另一側臂。將一段短管（約6英寸或15 cm）裝在通氣孔中，末端連接一濾器，借助張力器用管索將管子與通氣孔和濾器固牢。

3. 將一段長管（30~60 cm）連接至進氣孔，并在末端連接一濾器，用管索加固，另一段管子連接于濾器的另一端，用管索固牢。管子末端用鋁箔封好。

4. 將與兩孔裝置相對的側壁上的蓋子旋轉90度以松開，高壓滅菌培養瓶1 h。

5. 將適應了無血清培養液的細胞接種于經高壓滅菌的培養瓶中。將培養瓶裝至半滿至全滿之間，加入足夠的無血清培養液以使細胞終密度達到5×10⁵~6×10⁵細胞/ml 至1.5×10⁶細胞/ml。

6. 將培養瓶放在27℃培養箱中的磁力攪拌器上。將攪拌速度設置在80 r/min。從進氣管的末端移去鋁箔，并將它連接到供氣泵。接通泵的電源，使其流量達到500~700 ml/min。

7. 細胞生長至密度約1.5×10⁶細胞/ml。在層流室中將感染復數（MOI）為1~2的病毒通過側臂直接加到培養瓶中。

8. 于27℃將培養瓶置于磁力振蕩器上并通氣，確定溫育培養物的時間。

9. 處理上清得到分泌蛋白或處理細胞得到胞內蛋白。

圖1. 配有兩孔蓋裝置的Bellco 旋轉培養瓶