酶活力照紫外可見分光光度法(通則1)測定。磷酸鹽緩沖液取0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液適量,用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液調節pH值至8.0。
供試品溶液取本品約0.1g,精密稱定,加磷酸鹽緩沖液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5單位的溶液。對照品溶液取經105℃干燥至恒重的硫酸銨適量,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成約0.0015mol/L的溶液。測定法取試管3支(14cm×1.2cm),各加人用磷酸鹽緩沖液配制的0.33%門冬酰胺溶液1.9ml,于37℃水浴中預熱3分鐘,分別于第1管(t)中加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,第2、3管(t)中各精密加入供試品溶液0.1ml,置37℃水浴中,準確反應15分鐘,立即于第1管(to)中精密加入供試品溶液0.1ml,第2、3管(t)中各加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,搖勻,分別作為空白反應液(to)和反應液(t)。
精密量取to、t和對照品溶液各0.5ml,置試管中,各加水7.0ml與碘化汞鉀溶液(取碘化汞23g、碘化鉀16g,加水至100m1,臨用前與20%氫氧化鈉溶液等體積混合)1.0ml,混勻,另取試管1支,加水7.5ml與碘化汞鉀溶液1.0ml作為空白對照管,室溫放置15分鐘,在450nm的波長處分別測定to吸光度A0、t吸光度A:和對照品溶液吸光度As,以A:的平均值按下式計算效價(單位/mg)(A2-A0)×5×稀釋倍數×FAs×稱樣量(mg)式中5為反應常數;F為對照品溶液濃度的校正值效價單位定義:在上述條件下,一個門冬酰胺酶單位相當于每分鐘分解門冬酰胺產生1pmol氨所需的酶量蛋白質含量取本品約20mg,精密稱定,照蛋白質含量測定法(通則0731第一法)測定,即得比活由測得的效價和蛋白質含量計算每1mg蛋白中含門冬酰胺酶活力的單位數。