限制性內切酶消化DNA實驗——部分消化

有時需要得到僅在DNA片段的內部存在的部分限制性位點切割產生DNA，這在用待克隆片段內部存在的限制酶切位點進行克隆和構建酶切圖譜時特別有用。

DNA

限制性內切酶緩沖液

電泳儀

1.  配制100 ul 含DNA和1x限制酶緩沖液的反應混合物。

2.  將反應混合物加入反應管中，其中管1加30 ul；管2~管4各加20ul；管5加10 ul， 置于冰浴。

3.  加入所選用的酶至管1（3~10 U/ug DNA），輕彈管壁混勻，置于冰浴。

4.  使用不同的吸頭，從管1中取10 ul 加入到管2，快速混勻，置于冰浴。

5.  依次連續稀釋，從管2到管3，管3到管4，管4到管5，最后每個管的體積均為20 ul。

6.  每個小管在合適溫度溫育15 min 后終止反應。

7.  進行電泳分析，或進一步酶切處理。