霉菌的形態觀察

實驗概要

掌握觀察霉菌形態的基本方法，并觀察其形態特征。

實驗原理

　　
霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，而且孢子很容易飛散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片其特點是：(a)細胞不變形；(b)具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間；(c)溶液本身呈藍色，有一定染色效果。

　　
霉菌自然生長狀態下的形態，常用載玻片觀察，此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養基上，培養后用顯微鏡觀察。此外，為了得到清晰、完整、保持自然狀態的霉菌形態還可利用玻璃紙透析培養法進行觀察。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長在覆蓋于瓊脂培養基表面的玻璃紙上，然后將長菌的玻璃紙剪取一小片，貼放在載玻片上用顯微鏡觀察。

主要試劑

乳酸石炭酸棉藍染色液，20％甘油，查氏培養基平板，馬鈴薯培養基；

主要設備

無菌吸管，載玻片，蓋玻片，U形棒，解剖刀，玻璃紙，濾紙等。

實驗材料

曲霉（Aspergillussp．），青霉（Penicillium sp．），根霉（Rhizopus sp．），毛霉（Mucor sp．）；

實驗步驟

　　
1．一般觀察法

　　于潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉藍染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。

　　
2．載玻片觀察法

　　(1)將略小于培養皿底內徑的濾紙放入皿內，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數套（根據需要而定）如此裝置的培養皿疊起，包扎好，用1．05kg/cm2，121．3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌，備用。

　　(2)將6—7ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后，用無菌解剖刀切成0．5—1cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養皿內的載玻片上，每片上放置2塊。

　　(3)用滅菌的尖細接種針或裝有柄的縫衣針，取（肉眼方能看見的）一點霉菌孢子，輕輕點在瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上，再蓋上皿蓋。

　　(4)在培養皿的濾紙上，加無菌的20％甘油數毫升，至濾紙濕潤即可停加。將培養皿置28℃培養一定時間后，取出載玻片置顯微鏡下觀察。

　　
3．玻璃紙透析培養觀察法

　　(1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水，洗下孢子，制成孢子懸液。

　　(2)用無菌鑷子將已滅菌的、直徑與培養皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養基平板上。

　　(3)用1ml無菌吸管吸取0．2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上，并用無菌玻璃刮棒涂抹均勻。

　　(4)置28℃溫室培養48小時后，取出培養皿，打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養基分開，再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上，用顯微鏡觀察。

注意事項

　　1．結果

　　繪圖說明你所觀察到的霉菌形態特征。