非標記抗體免疫酶組織化學實驗——ABPAP法

石蠟切片ABC 復合物PAP 復合物動物血清

蛋白酶特異性一抗橋抗體PBSDABH2O2

滴管玻片

1. 4 μm 石蠟切片 58℃ 烤片 4 h，切片常規脫蠟至水，PBS 洗 3 min×3 次。

2. 蛋白酶消化或 AR（組織抗原的暴露或抗原的修復，此步視情況而定）。

3. 0.3％ H₂O₂ 處理切片 20 min（室溫），PBS 洗 3 min × 2 次。

4. 3％ 正常動物血清處理切片 30 min（室溫），吸去多余血清，不洗。

5. 適當稀釋的特異性一抗孵育（4℃ 過夜或 37℃ 60 min），PBS 洗 3 min × 3 次。

6. 滴加橋抗體（二抗），37℃ 孵育 30 min，PBS 洗 3 min × 3 次。

7. 適當稀釋的 PAP 復合物（要求與特異性一抗同一種屬）37℃ 孵育 30 min。

8. PBS 洗 3 min × 3 次。

9. 適當稀釋的生物素化羊抗兔或抗鼠二抗（根據 PAP 復合物種屬而選擇不同的二抗）37℃ 孵育 30 min，PBS 洗 3 min × 3 次。

10. 適當稀釋 ABC 復合物 37℃ 孵育 30 min，PBS 洗 3 min × 3 次。

11. 0.04％ DAB-0.03％ H₂O₂ 顯色 8～12 min。

12. 水洗、復染、脫水、樹膠封片，觀察結果。