1. 用 PM 或 YE 培養基培養細胞，至滴度到每毫升 1X107 個細胞。
2. 用冰冷的過濾除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗細胞 3 遍，以降低細胞的導電性。
3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重懸細胞，使滴度為每毫升 1X109 個細胞。
4. 將 1 ng~1 μg DNA 和 0.2 ml 細胞混勻，立即轉移到冰冷的電穿孔杯中。
5. 于 2.25 kV、200 Ω、25 μF 對細胞進行電穿孔，立即加入 0.5 ml 冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇。
6. 在非常干的選擇性 PM 平板上涂板。
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