細菌的鞭毛很纖細，其直徑通常為 0.01 ~0.02 μm， 所以，除了很少數能形成鞭毛束（由多根鞭毛構成）的細圈可以用相差顯微鏡直接觀察到鞭毛束的存在外，一般細菌的鞭毛均不能用光學顯微鏡直接觀察到，而只能用電子顯微鏡觀察。要用普通光學顯微鏡觀察細菌的鞭毛，必須用鞭毛染色法。
鞭毛染色方法很多，本實驗介紹硝酸銀染色法和改良的 Leifson 氏染色法，前一種方法更容易掌握，但染色劑配制后保存期較短。
| 實驗方法原理 | 鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染劑處理含使它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進行染色。 |
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| 實驗材料 | 蘇云金芽孢桿菌假單胞菌金黃色葡萄球菌 |
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| 試劑、試劑盒 | 硝酸銀鞭毛染色液0.01％ 美藍水溶液 |
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| 儀器、耗材 | 載玻片蓋玻片凹載玻片無菌水凡士林顯微鏡 |
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| 實驗步驟 | 1. 菌種的準備 要求用活躍生長期菌種作鞭毛染色和運動性的觀察。對于冰箱保存的菌種通常要連續移種 1～2 次，然后可選用下列方法接種培養作染色用菌種：
1.1 取新配制的營養瓊脂斜面（表面較濕潤。基部有冷凝水）接種， 28～32℃ 培養 10～14 h， 取斜面和冷凝水交接處培養物作染色觀察材料；
1.2 取新制備的營養瓊脂（含 0.8～1.0％ 的瓊脂）平板，用接種環將新鮮菌種點種于平板中央， 28～32℃ 培養 18～30 h， 讓菌種擴散生長，取菌落邊緣的菌苔（不要取菌落中央的菌苔）染色觀察的菌種材料。
2. 載玻片的準備 將載玻片在含適量洗衣粉的水中煮沸約 20 min， 取出用清水充分洗凈，瀝干水后置 95％ 乙醇中，用時取出在火焰上燒去酒精及可能殘留的油跡。
3. 菌液的制備 取斜面或平板菌種培養物數環于盛有 1～2 ml 無菌水的試管中，制成輕度混濁的菌懸液用于制片，也可用培養物直接制片，但效果往往不如先制備菌液。
4. 制片 取一滴菌液于載玻片的一端。然后將玻片傾斜，使菌液緩緩流向另一端，用吸水紙吸去玻片下端多余菌液，室溫（或 37℃ 溫室）自然干燥。 干后應盡快染色，不宜放置時間過長。
5. 染色 涂片干燥后，滴加硝酸銀染色 A 液覆蓋 3～5 min， 用蒸餾水充分洗去 A 液，用 B 液沖去殘水后，再加 B 液覆蓋涂片染色約數秒至 1 min， 當涂面出現明顯褐色時，立即用蒸餾水沖洗。若加 B 液后顯色較慢，可用微火加熱，直至顯褐色時立即水洗。自然干燥。 配制合格的染色劑（尤其是 B 液）、充分洗去 A 液再加 B 液、掌握好 B 液的染色時間均是鞭毛染色成敗的重要環節。
6. 鏡檢 干后用油鏡觀察。觀察時，可從玻片的一端逐漸移至另一端，有時只在涂片的一定部位觀察到鞭毛。
菌體呈深褐色。鞭毛顯褐色、通常呈波浪形。 展開 |
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| 注意事項 | 1. 良好的培養物，是鞭毛染色成功的基本條件，不宜用已形成芽孢或衰亡期培養物作鞭毛染色的菌種材料，因為老齡細菌鞭毛容易脫落。
2. 玻片要求光滑、潔凈，尤其忌用帶油跡的玻片（將水滴在玻片上。無油跡破片水能均勻散開）。
3. 挑菌時，盡可能不帶培養基。 |
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