一、目的
1、熟悉樣品中總砷信量的測定方法。
2、進一步熟悉分光光度法。
二、原理
樣品經消化后，利用鋅與酸作用所產生原子態氫，在碘化鉀和氯化亞錫存在下將樣品中高價砷還原成三價砷，與氫作用生成砷化氫，經銀鹽溶液吸收后，形成紅色膠體，溶液的顏色呈紅色。顏色的深淺與砷的含量成正比，與標準系列比較定量。反應式如下：
三、試劑
硝酸、硫酸、鹽酸、氧化鎂、無砷鋅粒
硝酸——高氯酸混合液(4+1)：量取80mL硝酸，加20mL高氯酸混勻。
硝酸鎂及硝酸鎂溶液：稱取1.5g硝酸鎂[Mg(NO3)2·6H2O]溶于水中，稀釋至100mL。50g/L碘化鉀溶液：貯于棕色瓶中。
酸性氯化亞錫溶液：稱取40g氯化亞錫(SnCL2·2H2O)加鹽酸溶解并稀釋至100mL，加入數顆金屬錫粒。
6mol/L鹽酸：量取50mL鹽酸加入稀釋至100mL。100g/L乙酸鉛溶液。
乙酸鉛棉花：用100g/L乙酸鉛溶液浸透脫脂棉后，壓除多余溶液，并使疏松，在100℃以下于燥后，貯于玻璃瓶中。
200g/L氫氧化鈉溶液。
100g/L硫酸：量取5.7mL硫酸加入80mL水中，冷卻后再加入釋釋至100mL。
二乙氨基二硫代甲酸銀――三乙醇胺――三氯甲烷溶液：稱取0.25g二乙氨基二硫代甲酸銀[(C2H5)2NCS2Ag]置于乳缽中，加少量三氯甲烷研磨，移入100mL量筒中，加入1.8mL三乙醇胺，再用三氯甲烷分次洗滌乳缽，洗液一并移入量筒中，再用三氯甲烷稀釋至100mL，放置過夜，濾入棕色瓶中貯存。
砷標準溶液：精確稱取0.1320g經硫酸干燥器干燥或在100℃干燥2h的三氧化二砷，加5mL 200g/L氫氧化鈉溶液5mL，溶解后10%硫酸25mL，轉移入1000mL容量瓶中，用新煮沸冷卻的水稀釋至刻度，貯存于棕色玻塞瓶中。此溶液每毫升相當于0.1mg砷。
砷標準使用液：吸取1.0mL砷標準溶液，置于100mL容量瓶中，加1mL10%硫酸溶液，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當于1μg。
四、儀器
(1)分光光度計。
(2)砷化氫吸收裝置
五、操作方法
1、樣品處理
①硝酸-高氯酸-硫酸法：根據樣品含水量的高低確定取樣量的不同。含水分較少的固體食品取5.0~10.0g的粉碎樣品；醬類食品稱取10.0~20.0g樣品；含水分較高的果蔬類稱取25.0~50.0g打成勻漿的樣品；飲料類可吸取10~20mL。
將試樣置于250~500mL定氮瓶中，干燥的試樣可先加少許水潤濕，加數粒玻璃珠，10~15mL硝酸-高氯酸混合液，放置片刻，小心緩緩加熱，待作用緩和后放冷。然后沿瓶壁加入5mL或10mL硫酸，再繼續加熱，直至瓶中開始變成棕色時，不斷沿瓶壁滴加硝酸高氯酸混合液使有機物質分解完全。加大火力至產生白煙，溶液呈現澄清無色或微帶黃色，放冷。注意操作過程中防止爆炸。
在瓶內加20mL水煮沸來除去殘余的硝酸至產生白煙為止。如此處理兩次，放冷。將冷卻后的溶液移入50ml或100ml容量瓶中，用水洗滌定氨瓶，洗滌并入容量瓶中，冷卻，加水至刻度混勻。此溶液每毫升相當于1g樣品，相當加入硫酸量1ml。取與消化樣品相同量的硝酸高氯酸混合液和硫酸置于另一定氮瓶中，按同一方法作試劑空白試驗。
②灰化法：稱取5.0g或吸取5.0ml樣品，置于坩堝中(液體樣品需先在水浴上蒸干)，加1g氧化鎂及10ml硝酸鎂溶液混勻，浸泡4h(植物油不用浸泡)。在水浴鍋上蒸干。在電爐炭化至無煙，再移入550℃高溫爐內灼燒3~4h，至灰化完全，冷取后取出。
加入5ml水濕潤灰分，再緩慢加入6mol/L鹽酸10ml,再轉移入50mL容量瓶中，坩堝用6mol/L鹽酸洗滌三次，每次3ml，再每次5ml用水洗滌3次，洗液并入容量瓶中。用水定容至刻度，混勻。此溶液10ml相當于1g樣品，相當于加入鹽酸量(中和需要量除外)1.5ml。
取與灰化樣品相同量的硝酸鎂和氧化鎂，按同一方法作試劑空白試驗。
2、測定
①吸取一定量的濕法消化后的定容溶液(相當于5g樣品)及等量的試劑空白液，分別置于250ml容量瓶中，補加硫酸至總量為5ml，加水至50~55mL。
吸取0.0.、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml砷標準使用液(相當0、2、4、6、8、10μg砷)分別置于150mL錐形瓶中，加水至40mL,再加10ml(1＋1)硫酸溶液.
②吸取一定量的灰化法消化液(相當于5g樣品)及等量的試劑空白液，分別置于150mL錐形瓶中。吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL砷標使液(相當于0、2、4、6、8、10μg砷)分別置于150mL錐形瓶中，加水至43.5mL,再加6.5mL鹽酸。
③于樣品消化液。試劑空白液及砷標準溶液中各加3mL 150g/L碘化鉀溶液、0.5mL酸性氯化亞錫溶液，混勻后靜置15min。各加入3g鋅粒，立即分別塞上裝有乙酸鋁棉花的導氣管，并使管的末端插入盛有4mL銀鹽溶液的吸收管中的液面下(不得漏氣)，在常溫下反應45min，取下吸收管，用三氯甲烷補足4mL。用1cm比色杯，以零管調節零點，在波長520nm處測吸光度，繪制標準曲線。
六、結果計算：
X= (3-16)
式中：X—-樣品中砷的含量，mg/kg或mg/L;
A1—-測定用樣品消化液中砷的含量，μg；
A2 —-試劑空白液中砷的含量，μg；
m—-樣品質量(體積)，g(ml)。
V1――樣品消化液的總體積，ml；
V2――測定用樣品消化液的體積，ml。
注意事項
1.氯化亞錫(SnCL2)試劑不穩定，在空氣中能氧化生成不溶性氯氧化物，會失去還原劑作用。配置時加鹽酸溶解為酸性氯化亞錫溶液，加入數粒金屬錫，持續反應生成氯化亞錫，新生態氫具有還原性，以保持試劑穩定的還原性。氯化亞錫在本試驗中的作用是：還原As5+成As3+以及在鋅粒表面沉淀層以抑制產生氫氣作用過猛。
2.乙酸鉛棉花塞入導氣管中，是為吸收可能產生的硫化氫，使其生成硫化鉛阻留在棉花上，以免被吸收液吸收產生干擾；因為硫化物可與銀離子生成灰黑色的硫化銀。
3.二乙氨基二硫代甲酸銀或稱二乙基二硫代氨基甲酸銀鹽，分子式為(C2H5)2NCS2Ag，為黃色粉末，不溶于水而溶于三氯甲烷，性質極不穩定，遇光或熱，易生成銀的氧化物而呈灰色，所以配制濃度不易控制。如果市售品不適用，實驗室可自行制備，其方法如下：分別溶解1.7g硝酸銀、2.3g二乙氨基二硫代甲酸鈉(DDCNa，銅試劑)于100mL水中，冷卻至20℃以下，緩緩攪拌混合，過濾生成的檸檬黃色銀鹽(AgDDC)沉淀，用冷的蒸餾水洗滌沉淀數次，在干燥器內干燥，避光保存備用。
吸收液中AgDDC濃度以0.2%~0.25%為宜，濃度過低將影響測定的靈敏度和重現性。因此，配置試劑時，應放置過夜或在水浴上微熱助溶，輕微的渾濁可以過濾除去。若試劑溶解度不好時，應重新配置，吸收液必須澄清。
4.無砷鋅粒不同形狀和不同規格，因其表面面積不同，與酸反應的速度就不同，生成氫氣氣體流速不同，將直接影響吸收效率及測定結果。一般地蜂窩狀鋅粒3g，或大顆粒鋅粒5g均可獲得良好結果。一般確定標準曲線與試樣均用同一規格的鋅粒為宜。
5.樣品消化液中的殘余硝酸需設法驅盡，硝酸的存在影響反應與顯色，會導致結果偏低，必要時需增加測定用硫酸的加入量。
6.吸收液吸收砷化氫氣體后呈色在150min內比較穩定。