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  • 發布時間:2012-01-05 16:25 原文鏈接: 食品安全國家標準乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的測定

      針對近日來國家質檢總局公布了的蒙牛乳業(眉山)和福建長富純牛奶抽查的產品被檢出黃曲霉毒素M1超標的問題。蒙牛乳業對此向民眾進行了致歉申明,反應了民族企業的責任心和對食品安全的重視。對于黃曲霉毒素M1的限量,在之前的相關食品衛生標準中有明確規定,其中:鮮乳及其乳制品(折算為鮮乳汁)不得超過0.5ug/kg;嬰兒代乳食品不得檢出黃曲霉毒素b1。(GB 2761-2005國家標準—食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003國家標準—乳及乳制品中黃曲霉毒素M1限量!

      黃曲霉毒素主要存在于谷物、堅果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些與人類血液,動物飼料相關的產品中。霉菌的生長并不一定表明黃曲毒素的存在,因為黃曲毒素只有在濕度、溫度適合及通風良好才會生成。黃曲霉素B類具有藍色熒光,G類具有綠色熒光。除了蔬菜中常見的(B1,B2,G1,G2),還有存在喂食了有毒飼料的奶牛的牛奶中的黃曲霉素M,其中毒性最高的M的代謝物為4-羥基化的產物Bs.黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產物,也是一種強致癌物質。其危害巨大,人類日常消費食品中如牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用,嚴重時,可導致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其實主要是指黃曲霉毒素比砒霜毒。

      目前來講,Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC),酶聯免疫檢測法等。液相色譜法可以精確的檢測奶制品中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。

      作為國內專業從事霉菌毒素檢測技術與產品服務的主要供應商, 2010年泰樂祺科技投巨資成立了"檢測應用實驗室",重點關注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等檢測技術問題,以期望快速提出解決方案。近期應針對奶中出現的黃曲霉毒素M1超標問題,泰樂祺科技提供了兩種檢測方案,可以幫助企業輕松應對奶中黃曲霉毒素M1的限量檢測。

      高效液相色譜法:

      根據國標《GB 5413.37—2010》食品安全國家標準乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定

      實驗用前處理:

      實驗儀器和好耗材包括:

      恒溫水浴鍋  溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質器 黃曲霉毒素免疫M1親和柱 玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管

      實驗用試劑:色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等

      HPLC條件:

    高效液相色譜儀
    色譜柱
    C18柱,150*4.6mm5um
    流動相
    乙腈-水(2575
    熒光檢測器:
    激發波長365nm,發射波長435nm
      
    室溫
    流速
    1.0ml/min
    進樣量
    20ul
    出峰時間
    10分鐘左右

      樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程,所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。

      樣品前處理:分不同樣品

      奶粉樣品,用于蒸餾水溶解中,調節PH值至微堿性,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;

      免疫柱凈化步驟:完全符合GB/T18980-2003

      ┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫,將上方塞子取出斜剪斷,再插回親和柱上。

      ┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器;

      ┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

      ┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調節壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

      ┅┅準確加入4mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測。

      注:收集管中的洗脫液即為純化后的樣品,可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。

      HPLC 檢測需要儀器與耗材

    產品名稱
    說明
    規格
    黃曲霉毒素M1固體標準品
    參比對照使用
    100ug 1mg  
    黃曲霉毒素M1液體標準品
    濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈
    1ml
    PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱
    用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素
    25/50T
    PriboFast泵流操作架(8位)
    用于免疫親和柱凈化樣品處理,方便控制流速
    黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙
    用于去除HPLC檢測時部分雜峰,有效提高靈敏度。1101.5um
    100P
    不銹鋼均質器
    高速勻漿樣品,有效提高萃取效率
    旋轉蒸發儀-超聲波發生器

      酶聯免疫檢測法:符合國家標準

      酶聯免疫檢測法采用競爭ELISA,在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標準品溶液)及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線,即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。

      樣品處理

      牛奶 直接離心取上清液用于檢測

      奶粉及其他固狀奶制品:需要溶解于去離子水中,離心取上清液用于檢測

      試劑盒檢測時間:30分鐘+30分鐘

      交叉反應率:

    Aflatoxin M1
    100%
    Aflatoxin B1
    8%
    Aflatoxin B2
    10%
    Aflatoxin G1
    7%
    Aflatoxin G2
    5%
    ELISA 方法檢測需要:
    說明
    PriboFast 黃曲霉毒素M1酶聯免疫檢測試劑盒
    檢測范圍 (0.1 ppb 8.1ppb)
    96
    雷勃半支滅菌移液器(彩色)
    多個量程:0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul
    雷勃八道半支滅菌移液器
    量程: 5-50ul; 50-300ul
    酶標儀
    進口、國產儀器,

      分析人員要求:

      化學分析儀器及其相關專業或有高效液相色譜儀操作經驗的人員。

      注:作為面向全球提供霉菌毒素檢測技術解決方案的主要服務商之一,PriboLab憑借強大的研發團隊和霉菌毒素檢測技術的研究,為全球農業生產、食品加工與糧食、飼料工業等行業提供專業的真菌毒素檢測技術產品與技術服務。北京泰樂祺作為PriboLab在中國的唯一合作伙伴,積極為國內客戶提供優質的霉菌毒素檢測技術與產品服務,為國內客戶提供適宜的霉菌毒素檢測方案,幫助國內客戶建立高效優質的霉菌毒素項目檢測平臺。

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